血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用价值

【摘 要】

目的：应用毛细管血红蛋白电泳技术筛查疑似地中海贫血患儿，为查找贫血原因提供参考价值。提高地中海贫血患儿生存质量和预后治疗提供有力保障。

方法 选取134例贫血患者作为研究组，选取50例非贫血健康者作为对照组。开展血液常规分析、血红蛋白各组分定量检测、地中海贫血相关基因检测，并以基因检测为确诊实验。计算各方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测，对比两组数据的检测结果，选择适合各级医疗机构开展的地中海贫血实验的筛查方法。

结果：134例标本中，血液常规分析异常109例、阳性率为81.3%、敏感性为100%、特异性为39.7%、阳性预测值为57.8%、阴性预测值为100%；血红蛋白电泳异常占83例、阳性率为61.9%、敏感性为100%、特异性为80.9%、阳性预测值为75.9%、阴性预测值为100%；基因实验阳性占63例，阳性率为47%。

结论 全自动毛细管电泳技术具有自动化程度高、检测结果准确快速，符合基因诊断，且方便快捷简单等，值得大力推广。

【关键词】毛细管电泳 ；地中海贫血 ； 基因确诊

Abstract Objective：

Purpose Applying the technology of capillary hemoglobin electrophoresis to screening children suspected of thalassemia， providing reference value for finding out the cause of anemia. To improve the quality of life and prognosis of children with thalassemia to provide effective protection.

Method Select 134 patients with anemia as study group and 50 cases of non-anemia healthy persons as control group. Carry out routine blood analysis， quantitative determination of hemoglobin components， detection of genes associated with thalassemia， and using gene detection as a diagnostic test. Calculate the sensitivity， specificity， positive predictive value， negative predictive value of each method， compare the results of two groups of data， select screening Methods：suitable for thalassemia experiments conducted by medical institutions at all levels.

Result： in the 134 specimens， there were abnormal 109 cases of routine blood analysis， the positive rate was 81.3%， the sensitivity was 100%， the specificity was 39.7%， the positive predictive value was 57.8%， negative predictive value was 100%； there were abnormal 83 cases of hemoglobin electrophoresis， the positive rate was 61.9% and the sensitivity was 100%， the specificity was 80.9%， the positive predictive value was 75.9%， negative predictive value was 100%； there were 63 cases of positive gene experiment， The positive rate was 47%.

Conclusion： Automatic capillary electrophoresis is worth popularizing not only with high degree of automation， accurate and fast results but also conforms to genetic diagnosis， conveniently， quickly and convenient， etc.For worth promoting.

Key words： Capillary electrophoresis；Thalassemia；genetic diagnosis

【中圖分类号】 R249

【文献标识码】 A

【文章编号】 1672-3783（2019）02-03-153-01

贫血是儿科常见疾病之一，若不引起充分的重视，会导致一系列的严重后果，从而影响生长发育。因此对于临床小儿贫血的诊断相当关键，查找贫血原因，对贫血对因治疗尤为重要，其中地中海贫血临床表现无明显的特异性，主要表现为黄疸、肝脾肿大、发育不良等，极严重者可能引发死亡[1]。临床诊断较困难，主要依据实验室诊断。随着精准医疗的发展与进步，对临床诊疗越来越提出严苛的要求，为提高临床诊断效率，全自动毛细管电泳技术应运而生。虽然目前用于明确诊断地中海贫血的是PCR技术结合分子生物学方法[2]，由于分子生物学技术要求高，价格昂贵等，不利于大面积人群筛查[3]；血红蛋白分析仪难以检出异常血红蛋白病[4]。因此本文研究毛细管电泳技术从而筛查出地中海贫血患者，以利于其在以后的医学诊断和预后观察中起重要作用。现将本研究结果汇报如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 研究对象来自于2017年1月至2018年8月在我院儿科就诊中疑似贫血的患儿作为实验组，共计134例，其中男89例、女45例，年龄1月-14岁；选取50例非贫血健康体检者进行正常对照，年龄1月-14岁，其中男30例、女20例。两组年龄、性别等一般资料比较结果差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 主要仪器和试剂

1.2.1 血液常规分析 采用Sysmex XE-2100全自动血球分析仪器进行血液常规分析，仪器质控品和各实验所用的试剂均为仪器配套试剂。

血红蛋白电泳 采用法国Sebia公司的MINCAP全自动毛细管电泳仪，质控和各实验所用的试剂均为仪器的配套试剂。

基因检查 试剂为潮州凯普生物化学有限公司提供，在有效期内检测。

1.3 方法与诊断

1.3.1 血液常规检测

血液常规分析严格按照仪器操作说明书进行；MCV 正常参考值设置男女儿童80---100fl，新生儿100--120fl，截断值设置为男女儿童<80fl，新生儿<100fl。

1.3.2 血红蛋白电泳操作

两组研究对象分别采血3mlEDTA-K2抗凝全血各3支以备分析检测用，血红蛋白电泳方法需将研究对象的静脉血3mL 5000转r/min离心5分钟，弃上层血浆，按毛细管电泳仪说明书操作对研究对象标本进行检测，用Hb A2质控品进行质量控制；参考范围为：新生儿：Hb A 12%-40%，Hb A2 0.1%-1%，Hb F 60%-93%；<6月儿童：Hb A 86%-98%，Hb A2 0.87%-2.9%，Hb F0.84%-10.7%；>6月儿童：Hb A 96.8%-97.8%，Hb A2 2.2%-3.2%，Hb F 0.5%；该参考值来源于配套试剂提供，本研究截断值设置为各年龄段检测结果超出参考范围。

1.3.3 基因检测

采用多聚酶链扩增（GAP-PCR）技术和DNA芯片反向斑点杂交检测技术，所用操作均严格按照试剂操作说明书进行，并同时进行阴阳性质控对照以保证检测结果。

1.4 实验评价指标 灵敏性、特异性 、阳性预测值、阴性预测值。

1.5 将本研究所得数据纳入SPSS17.0软件进行统计与分析，研究组的各实验方法均与对照组进行检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 134例研究组中的异常血红蛋白结果。

Hb H占3例，Hb E占2例，Hb Bart"s占2例，Hb C占1例。

2.2 研究组与对照组的实验结果

研究与对照血液常规分析、Hb电泳、基因实验结果对比，由下表可知研究组检测的阳性率均高于对照组，比较结果差异有统计学意义（P<0.05）

MCV异常是指MCV<80fL，异常HB电泳是指超过试剂厂商提供的参考值，基因实验阳性是指检出携带有地中海贫血基因。

2.3 血液常规分析与血红蛋白电泳检测方法的实验结果

血液常规分析（MCV<80fL）有109例，异常HB电泳有83例，此两种实验方法均通过基因实验确认真阳性的有63例

2.4 血液常规分析与血红蛋白电泳实验方法的评价

3 讨论

毛细管电泳技术时利用不同分子量成分在电场中移动速度不同而分离，同时根据H b AFSC质控品的定位，设定15个特异的血红蛋白组分区域（Z1～Z15），能够自动识别和定量静脉血中的各种血红蛋白组分。地中海贫血是一种遗传性血液病，目前尚无治愈该疾病的有效方法，因此在于筛查出此种疾病，对于临床诊断及评估预后有很大帮助。血红蛋白电泳传统的方法有醋酸纤维薄膜和琼脂糖电泳，这些方法操作均较繁琐，结果易受操作者影响，准确性难以保证，分辨率不够高，而且某些异常的血红蛋白不能分离。因此，需要自动化程度更高，影响因素更少，分辨率更高的检测技术，因此全自动毛细管电泳技术應运而生。它是目前最先进、自动化程度最高的血红蛋白电泳仪器，能够定量检测各血红蛋白组分，是筛查地中海贫血的主要方法。

从研究结果中表1可以看出，本研究组的各实验方法结果存在统计学意义。说明该方法用于地中海贫血的筛查很有必要，通过表3从研究组个实验方法的评价指标看，血液常规指标分析的灵敏度及阴性预测值不能与血红蛋白电泳看出差异，但是血蛋白电泳的特异性及阳性预测值均高于普通的血液常规指标分析。本研究组中出现血红蛋白电泳异常结果83例，通过基因确认有63例阳性结果。说明与基因结果较符合，对于有效进行基因检测可以起筛检作用。从而避免所有MCV<80fl，都进行基因检测，这样可以节约医疗资源，避免不必要的浪费。

以前筛查地中海贫血，有许多手工项目，比如外周血涂片镜检观察红细胞的大小、靶形红细胞的数量、RBC脆性实验等[5]，由于采用手工操作，不同技术人员操作技能及认识形态的技能不同，可能会对筛查结果有影响，同时MCV降低也常见于缺铁性贫血[6]，本研究采用血清铁排除缺铁性贫血的干扰。因此本文研究与血液常规分析结果MCV<80fl相结合，再从63例基因阳性的结果回顾性分析看，MCV在71-80fl占6例，MCV在60-70fl占25例，MCV<60fl占30例，MCV>80fl仅占2例。说明当血液常规分析MCV值很低时，尤其是小于70fl时，除了常规排除缺铁性贫血的可能，更需要警惕地中海贫血的可能，提示需要进行基因试验的确诊。

再者从血红蛋白电泳的结果分析看，本研究中检测出Hb H 有3例、Hb E有2 例、Hb Barts有2例、Hb C 有1例 。此8例通过基因实验全部确认为基因阳性结果。通过全自动毛细管电泳技术分析看，此技术可直接分离出各种异常血红蛋白。定量检出异常血红蛋白应高度怀疑携带地中海贫血基因，需要进行基因确认实验。

虽然确诊地中海贫血是PCR及分子生物学检测方法，通过本文研究，全自动毛细管电泳技术在筛查地中海贫血中有着不可比拟的优点，该技术不仅自动化程度更高、分辨率更高、更简易快速化等优点，并且该技术可以做室内质控，使结果更加真实可靠。比较基因这类分子检测技术，有更操作的简单化、无需更高的技术要求及昂贵的设备及检测费用。适合在我国东南沿海地区等血红蛋白白疾病，尤其是地中海贫血高发地区[7]，特别适合作为常规筛项目。因此全自动毛细管血红蛋白电泳技术在地中海贫血中值得大力推广，尤其是在基层医疗机构中。

参考文献

[1] 吴蓓颖，江岑，王也飞，等。学常规、血清铁及血红电泳联合检测在地中海贫血非高发地区的筛查意义[J].中华血液学杂志，2016，37（10）：908-911

[2] 王晓忠，曾学辉，等MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳在产前筛查地中海贫血的价值[J].中国实验诊断学，2009，13（6）：761

[3] 郑琳，黄海龙，范向群，等.高效液相色谱技术检测β地中海贫血的临床价值探讨[J].中国妇幼保健，2011，26（11）：1665-1666.

[4] Keren DF Hedstrom D，Gulbranson R，et al.Comparison of sebia capilarys electrophoresis with the primus high-pressure lipuid chromatography in the evaluation of hemoglobinopathies[J].Am J Clin Pathol，2008，130（5）：824-831.

[5] 王曉忠，曾学辉等。MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳在产前筛查地中海贫血的价值90[J]，2009，13（6）：762。

[6] 陈和平，陈冬李明等。缺铁性贫血和地中海贫血在血常规中的鉴别诊断[J].中国实验诊断学，2006，10（1）：90

[7] Xiong F，Sun M，ZhangX，et al.Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi zhuang autonomous region of southern China[J]，Clin Genet，2010，78（2）：139-148.