构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素

材料与方法

1.1 材料

1.1.1 工具酶与试剂 PrimeSTAR HS DNA聚合酶（PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit）购自大连宝生物工程公司；限制性内切酶SexAⅠ和AscⅠ购自 Fermentas公司； 快连酶购自NEB公司； 质粒小量快速提取试剂盒购自美国 Axygen公司；酵母DNA提取试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；DNA回收试剂盒购自美国 Biomiga公司；氨苄青霉素、潮霉素、G418购自上海生工生物工程有限公司；酵母选择培养基（四缺，Ura-Trp-Leu-His）购自北京泛基诺（功能基因组）科技有限公司；番茄红素标品购自美国 Sigma-Aldrich 公司；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器与设备 PCR扩增仪，Eppendorf Mastercycler gradient；全自动凝胶成像系统，BIO-RAD Molecular Imager Gel DOC XR；台式高速离心机，Eppendorf 5415D； 紫外可见分光光度计，Shimadzu UV-2550； 高速冷冻离心机，Thermo Sorvall Evolution RC；高效液相色谱，Agilent Technologies Series 1260。

1.1.3 菌株、引物和质粒 本次研究所用菌株，引物和质粒已经分别在表1～3中列出。

1.1.4 培养基 LB 培养基：1%蛋白胨，0.5%酵母膏，1%氯化钠；SM-URA筛选培养基：0.8%酵母选择培养基（四缺，Ura-Trp-Leu-His），2%葡萄糖，0.01%His.，0.01%Trp.，0.01% Leu.；SM-LEU-URA筛选培养基：0.8%酵母选择培养基（四缺，Ura-Trp-Leu-His），2%葡萄糖，0.01%Trp.，0.01% His.；YPD培养基：2%蛋白胨，1%酵母膏，2%葡萄糖；无机盐培养基：按文献配制^[14]，用于酵母的高密度发酵。