宫颈癌前病变应用P16/Ki—67免疫细胞化学双染检查的诊断价值

检查（TCT）、人乳头瘤病毒DNA（HPVDNA）检测，应用P16/Ki-67免疫化学双染法检测宫颈癌前病变的阳性率，以病理活检结果为金标准，评估P16/Ki-67免疫化学双染法、TCT法检测宫颈癌前病变的准确性。结果 900例患者，以病理活检为金标准（阳性54例），发现宫颈癌前病变p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性为82.3%（696/846），敏感性为92.6%（50/54），TCT检查法的特异性为68.6%（580/846），敏感性为62.9%（34/54），两种检查方式比较，p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性、敏感性显著高于TCT法，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 P16/Ki-67免疫细胞化学双染检测可提高宫颈癌前病变诊断的准确性，效果确切，值得临床推广。

[关键词]癌前病变；宫颈癌；化学双染法；P16/Ki-67；细胞免疫学

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）4（c）-0125-03

Diagnostic value of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions

FANG Jia CHEN Feng-yan

Department of Pathology，People′s Hospital of Puning City，Guangdong Province，Puning 515300，China

[Abstract]Objective To explore the application of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining in the diagnosis of cervical precancerous lesions for its accuracy.Methods A total of 900 patients with cervical precancerous lesions who were treated in our hospital from May 2016 to March 2017 were selected.Each patient was provided with P16/Ki-67 immunochemistry double staining assay and thinprep cytologic test （TCT） for human papilloma virus DNA.The positive rate of cervical precancerous lesions was detected using P16/Ki-67 immunochemistry double staining method.The pathological biopsy results were set as the gold standard，the accuracy of P16/Ki-67 immunochemistry double staining and TCT detecting cervical precancerous lesions was assessed.Results Among 900 participants，54 subjects were examined as positivity by pathological biopsy.The specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions were 82.3% （696/846） and 92.6% （50/54）.By TCT，they were 68.6% （580/846） and 62.9% （34/54） respectively.Compared with the two examination methods，the specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining were superior to those by TCT with significant differences（P<0.05）.Conclusion The detection of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining can improve the diagnostic accuracy of cervical precancerous lesions in a definite effect，which is worthy of clinical promotion.

[Key words]Precancerous lesions；Cervical cancer；Chemical double staining；P16/Ki-67；Cellular immunology

宮颈原位癌的高发群体为30～35岁女性，浸润癌的高发群体为45～55岁女性[1]。宫颈癌的发病与吸烟、感染滴虫、单纯疱疹病毒Ⅱ型、沙眼衣原体、多产、多孕、初产年龄小、性伴侣过多、感染人乳头瘤病毒（HPV）等因素密切相关。宫颈癌早期无特异性临床表现，病情进展可出现排液、阴道流血等特征。研究表明，HPV是导致宫颈癌的因素之一，但只有持续长期感染HPV高危型病毒会引发高级别宫颈癌上皮内瘤变，进展为宫颈癌，同时通过新技术、新检测方式有助于提高宫颈癌筛查的准确性及有效性[2]。宫颈癌的细胞学筛查方式在实际临床操作中存在重复性差、灵敏度较低，检查结果存在一定的假阳性率及假阴性率，P16/Ki-67双染检测辅助细胞学技术诊断有助于降低阴道镜的转诊率。本研究探析P16/Ki-67免疫细胞化学双染检测在宫颈癌前病变诊断准确性，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2016年5月～2017年3月来我院就诊的宫颈癌前病变患者900例，均予以宫颈液基细胞学（TCT）检查、HPV检查，病理活检结果确诊，每位女性均接受P16/Ki-67免疫化学双染法检测、TCT检查、HPVDNA检测，根据世界卫生组织2014年《女性生殖器官肿瘤分类》标准分级，年龄23～59岁，平均（40.2±3.4）岁。文化程度：高中及以上学历者535例，初中及以下学历365例。排除标准：妊娠期、生理期、接受盆腔放射疗法患者。本研究经我院医学伦理委员会批准，参与研究者均知情同意。

1.2方法

P16/Ki-67细胞学双染方法由福州迈新生物技术开发公司提供的细胞学P16/Ki-67双染试剂盒。细胞薄片置于95%的乙醇中30 min，流动水冲洗1 min，应用EDTA8.0系统在95°C温度下热修复标本20 min，滴加100 ul过氧化物酶，室内常温孵育10 min，滴加Ki-67抗体、P16抗体组合，室温下孵育1 h，滴加100 μl显色剂DAB，常温下5 min孵育。苏木素染色，应用乙醇梯度脱水，中性树胶固封。进行HPVDNA检验，TCT检查，进行液基细胞学专用毛刷在宫颈内交界和鳞状上皮处采集细胞，细胞洗涮至TCT专用取样瓶内，TCT制片机制作为薄层涂片，经巴氏染色后予以镜检。以病理活检结果为金标准，评估p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测结果的准确性。

1.3检查评估标准及观察指标

比较p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测法、TCT检测法的特异度、灵敏度。特异度=真阴性例数/（真阴性+假阳性）例数×100%，灵敏度=真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%。P16/Ki-67细胞学双染检测结果评估[3]：Ki-67呈黄色，位于细胞核上，细胞核部分交叉反应呈棕褐色。p16呈红色，位于细胞质、细胞核上。阳性结果为双染细胞>1个出现在染色片内；双染细胞细胞核为棕褐色或黄色，而细胞质呈红色。阴性结果为染色片内出现单染细胞，未发现双染细胞。单染细胞为红色细胞质，棕褐色或黄色细胞核。两位病理医师阅片（巴氏染色涂片），良性或正常为阴性，异常腺上皮细胞、鳞状上皮浸润癌、高级别鳞状上皮内病变，包含原位癌、中、重度鳞状上皮不典型增生，低级别鳞状上皮内病变、不排除高级别鳞状上皮内病变，无法明确意义的非典型鳞状细胞均为阳性。

1.4统计学方法

数据进行SPSS 18.0软件系统处理分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

900例患者，以病理活检为金标准（阳性54例），p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性为82.3%（696/846），敏感性为92.6（50/54），TCT检查法的特异性为68.6%（580/846），敏感性为62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性、敏感性显著高于TCT法，差异均有统计学意义（P<0.05）（表1、2、3）。

表1 p16/Ki-67免疫细胞化学双染法与病理诊断宫颈癌前病变的诊断准确性评估（n）

表2 TCT法与病理诊断宫颈癌前病变的诊断准确性评估（n）

表3 p16/Ki-67免疫细胞化学双染法与TCT法特异性、灵敏性的比较[%（n1/n2）]

3讨论

目前，较多发达国家应用巴氏检查或常规细胞学检查法可降低宫颈癌的发病率。约有99%的宫颈癌患者与高危型病毒密切相关（HR-HPV）[4]。有研究发现，从起初感染HR-HPV到进展为宫颈癌最少不低于8年，HR-HPV阴性的女性在5～7年内不会进展为宫颈癌[5]。研究指出半年后再行细胞学检查只检测到部分高级别宫颈鳞状上皮病变[6]。其中约有1/3的高级别宫颈鳞状上皮病变持续感染最终诊断HR-HPV，HR-HPV多次检测或重复细胞学检验对阴道镜转诊率的下降效果不佳[7]。目前，临床医学已应用新型辅助检查方式提高宫颈癌及癌前病变检查的准确性[8]。有已发生癌变或出现癌变趋势的细胞核酸增生异常，在细胞形态出现变化前已经出现了核酸变化[9-10]。宫颈上皮DNA非整倍体缺少可用于评估临床预后。以往文献发现检测DNA倍体的阳性预测值具有一定差异性，可能与标本的数量、标本的选择密切相关[11]。

本研究探析辅助宫颈癌前病变诊断应用P16/Ki-67免疫细胞化学双染检测法的准确性，结果显示，p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性为82.3%（696/846），敏感性为92.6（50/54），TCT检查法的特异性为68.6%（580/846），敏感性为62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的特异性、敏感性显著高于TCT法，差异均有统计学意义（P<0.05），与宋艳等[12]的研究结果大体一致，宫颈癌前病变的细胞学检查是检测其形态学，如形态改变则细胞学检查则会出现一定的误差性，重復诊断的结果不佳[13]。本研究结果显示，以病理活检为金标准，p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的检查准确率与病理活检的准确率，均超过90%以上两者比较，差异无统计学意义（P>0.05），而TCT的检查阳性率为62.9%（34例）显著低于病理活检及p16/Ki-67免疫细胞化学双染法，p16/Ki-67免疫细胞化学双染法的检查的特异性及敏感性更高，提示p16/Ki-67免疫细胞化学双染法和病理活检的检查准确性更高，且检查方式对机体无创伤性[14]。临床已用单染Ki-67/P16法辅助检测宫颈鳞状上皮病变组织学，但需与组织形态学检测相结合，用于鉴别宫颈鳞状上皮萎缩性变化、反应性变化、化生或病变[15]。过去应用P16或Ki-67细胞单染评估结果准确性较低，P16可用于评估宫颈癌Ⅰ级的预后[16]。本研究结果显示，P16不仅在异常细胞上呈局限性表达，同时在健康的子宫化生、柱状、内膜细胞内表达均正常。P16过度表达阻滞细胞周期，细胞标本显示二者为双标蛋白表达方式[17]。单个癌细胞会通过HPV基因蛋白可通过P16/Ki-67的双阳性表达调控细胞周期[18-19]。在DNA倍体分析基础上，有可重复的细胞学制片双染P16/Ki-67可促使一过性感染的假阳性下降，可降低宫颈活检及阴道镜的创伤性检查，提高高级别宫颈鳞状上皮内病变的阳性预测值，降低患者的经济负担及心理压力[20]。

综上所述，P16/Ki-67免疫细胞化学双染检测可提高宫颈癌前病变诊断的准确性，效果确切，值得临床推广。

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（收稿日期：2018-01-23 本文编辑：崔建中）