两种方法对阿米巴包囊染色效果的比较

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0585-01

在临床检验，寄生虫学教学与研究工作中，制备染色清晰又可长期保存的标本，对现实重提形态结构和鉴别虫种非常重要。有关原虫的染色重点在细胞核的染色，其染料有苏木精、胭脂红、甲苯胺蓝等，其中以哈氏（Harris）、费氏（Delafield）、梅氏（Mayer）苏木精液等应用最多，我们收集并含有溶组织内阿米巴和结肠内阿米巴包囊的粪便，分别采用快速染色法和梅氏苏木精染色法进行染色，比较其染色效果，结果报告如下：

1.染色方法及染色步骤

1.1 快速染色法

据Lawless报道【1】，配制固定染色液：丙酮、冰醋酸各50ml，乙醛溶液10ml，肖氏液890ml（肖氏液由氯化高汞饱和于蒸馏水中2份加95%酒精1份组成，临用时每100ml加冰醋酸5ml），酸复红1.25g，耐绿0.5g，储存于棕色玻瓶中备用。

染色步骤：先取粪便直接涂于盖玻上呈薄层状，待干燥之前，即加固定染色液盖满涂片，经2分钟使之固定和染色，再把标本片放在酒精灯上慢慢加热，至有蒸气出现为止（切勿煮沸），即以自来水缓缓冲洗，然后放入50%和70%酒精中，各经30秒钟，再放入90%及纯酒精中，各15秒钟，再用纯二甲苯透明1分钟，最后用中性树胶封固于载玻片上，便可镜检，全过程只需10分钟。

1.2 梅氏苏木精染色法【2】

染液配制：苏木精1.0g，碘酸钠0.2g，钾明矾50.0g，蒸馏水100.0ml。先取钾明矾溶于蒸馏水中，再放苏木精，最后加碘液钠，不断振荡，溶解后保存于棕色瓶中，用纱布遮口，让其氧化成熟后（约2个月）可用。

染色步骤：先取粪便直接涂于盖玻片上呈薄层状，待干前，用42℃肖氏液固定5分钟，再以2%碘酒精脱汞（数小时或过夜），置70%酒精中，经60%，50%，40%和30%酒精，每次10分钟，移入水中，再放入染液中染色2天，用自来水充分洗净（约10分钟），后用1%盐酸褪色，流水冲洗后，再经逐级酒精脱水，二甲苯透明，各1—2分钟，最后用中性树胶封固于载玻片上便可镜检，全过程需2天以上。

2.结果

取两种染色方法所染的玻片标本，顺序观察溶组织内阿米巴包囊120个和结肠内阿米巴包囊120个（其中一组为121个），按附表项目进行观察记录，加以比较。

结肠内阿米巴两种染色法经卡方检验=23.48 P<0.01

3.讨论

通过细胞核（核膜，染色质粒的清晰与否和核仁的显示与否），细胞质，囊壁的比较观察，表明两种染色方法对溶组织内阿米巴包囊的染色效果，除细胞质在梅氏染色法较好外，其余大致相仿，差别无显著性（P>0.05）。但对结肠内阿米巴包囊染色效果，则以快速染色法较好，对包囊的结构显示较为满意（P<0.01），仅核仁的显示不如梅氏法染色好。由于快速染色法在10分钟内可以完成，显然比梅氏苏木精染色法节约时间，值得推广采用，但应注意，快速染色法所用的肖氏固定液中含汞，而未作脱汞处理，因此可以影响长期保存，有待进一步加以改进。

参考文献：

[1] 薛燕萍，黄松如，甘少伯（译）.肠道寄生虫指南（世界卫生组织） [M].常1版.北京：人民出版社，1998.

[2] 王维忠，徐新力，单颖，等.活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法的研究[J].热带医学杂志，2005，5（3）：289—290.