兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫抗体ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ检测结果分析

[摘要]本文就运用间接ELISA法对兰州地区372例不同临床类型的恶性肿瘤患者血清中弓形虫IgG抗体进行检测，以932例正常体检组作为对照，对伴发弓形虫病的阳性率进行统计，得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫的特点及规律，补充了兰州地区此项研究的空白。

[关键词] 恶性肿瘤；弓形虫；抗体IgG；ELISA

[中图分类号]R446 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）04（b）-120-02

The analysis of antibody IgG of patients suffering different kinds of m alignant tumor in Lanzhou area tested by ELISA

SUN Yan-fang1,JIA Ning1, DU Hui-fen2, YUAN Ming2, LIAN Xiao-wen2,LIKe-sheng2*

(1.Animal Science College in Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China;2.Tumor Hospital in Gansu, Medicine and Science Institute in Gansu, Lanzhou 730050,China)

[Abstract] The antibody IgG of Toxoplasma gondii in serum of 372 cases of patient suffering different kinds of m alignant tumor in Lanzhou area was tested by indirect ELISA, with the common team of 932 cases as a control. The positive rate of Toxoplasma gondii was counted, and the character and the rule of different kinds of m alignant tumor in Lanzhou area were deduced, filled the gap of this study in Lanzhou area.

[Key words] M alignancy;Toxoplasma gondii;Antibody IgG;ELISA

弓形虫于1908年由Nicolle和Manceaux发现[1]，是一种广泛存在于人和动物的机会性、专一性的细胞内寄生原虫，能引起人兽共患的弓形虫病。世界首例病人报道于1923年[1]，我国1955年从兔及猫体内分离出弓形虫，第一例患者发现于1964年[2]。国外有25%～ 50% 的人受到感染，欧洲一些地区的感染率高达80%，我国属于低感染区，感染率为5%～10%[3]，感染人数可能约有6 000万[4]。成人多为隐性感染，无明显症状。

有关弓形虫研究虽然很多，但关于恶性肿瘤患者体内弓形虫抗体的研究和报道则十分有限，且在兰州地区在不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫IgG抗体的研究报道尚属首次。本文对弓形虫抗体IgG进行了ELISA检测与分析，这将对人弓形虫病的深入研究具有重要意义。

1材料与方法

1.1检测对象

甘肃省肿瘤医院临床检验科癌症病人血清，甘肃省第二人民医院正常人体检血清。

1.2方法

1.2.1检测试剂弓形虫抗原，阳性标准对照，阴性标准对照（以上试剂来自中国农科院兰州兽研所），抗人IgG酶。

1.2.2仪器设备雷勃Multiskan MK3酶标仪（芬兰），EPSON LQ-630K打印机（日本），Wellwash 4MK2洗板机（芬兰），SSW型微电脑电热恒温水槽（上海），排枪Finnpipette 50~300 μl（上海），单枪Finnpipette 5~50 μl（上海），JB-W11型微量搅拌器（上海）。

1.2.3操作步骤常规抽取静脉血2.0 ml，分离血清，Doff管分病种分装，-20℃保存。其中，样品中正常人体检对照932份，乳腺癌118份，胃癌106份，肺癌73份，皮肤癌33份，肝癌24份，卵巢癌18份。

间接ELISA法检测IgG抗体。所测阳性进行第二次核对试验，均为阳性则最终判为阳性。

抗原分别按1∶1 000，1∶2 000，1∶4 000，1∶8 000浓度包被4条，封闭后，每种抗原浓度分别加抗人IgG酶1∶1 000，1∶2 000，1∶4 000，1∶8 000，每种组合浓度分别加入阴阳性及空白对照。分析得出最佳组合浓度为：抗原1∶1 000，酶1∶2 000。

间接ELISA法测抗体： 96孔检测板每孔加一份血清，单枪每次换一个枪头，每板均加阴阳性对照。微量搅拌器混匀后，入37℃恒温水浴锅30 min。洗板机水洗4次后，加入现配的抗人IgG酶50 μl。微量搅拌器混匀后同样37℃水浴30 min。洗板机水洗5次后，加底物A、B各一滴（50 μl），37℃水浴10 min显色，后加硫酸终止液。酶标仪测A值，并分析结果以判断阳性。

结果判定：据弓形虫标准阳性和标准阴性值对照分析，检测血清P/N ≥2.1判为阳性，P/N<2.1为阴性。

1.2.4统计学方法运用SPASS12.0统计。组内方差均小于0.05。单因素方差分析。

2结果

2.1恶性肿瘤总体与正常人弓形虫感染的比较

恶性肿瘤患者共372例，弓形虫阳性33例，阳性率8.87%。正常人共932，弓形虫阳性27例，阳性率2.90%。两者之间有非常显著差异（P<0.01）。

2.2不同性别恶性肿瘤患者弓形虫感染比较

男性患者164例，阳性数19例，阳性率11.59%。恶性肿瘤女性患者208例，阳性例数19例，阳性率9.13%。不同性别恶性肿瘤弓形虫感染者无显著性差异。

2.3不同类型恶性肿瘤患者阳性率比较

各癌症组和正常对照组均差异显著（P<0.05）。弓形虫IgG阳性百分率分别为：皮肤癌18.18%，肺癌17.81%，卵巢癌11.11%，肝癌8.33%，乳腺癌6.78%，胃癌4.72%。正常对照阳性率2.90%。见图1。

3讨论

弓形虫对组织无选择性，除红细胞外任何有核细胞均可被侵犯。临床表现复杂，要检获病原体而确诊较困难，PCR、DNA探针特异性强，敏感性高，但技术难度大，不宜在基层推广。因此，免疫学检验是诊断弓形虫感染的常用的重要方法。免疫方法有IHA（间接血凝试验）、IFA（免疫荧光抗体试验）、ELISA法、GICA（金标免疫层析试验）、DOT（免疫斑点试验）、DIFA（免疫固体凝集试剂盒）、滴金免疫测定法等。其中，ELISA法因其敏感性高，成本低，操作简便，在实际应用中被广泛应用。IgG、IgM和CAg是弓形虫的重要血清标志物，也是重要的检测指标，其中任何一项阳性即可判为弓形虫感染。自1976年Voller首次应用酶联免疫吸附试验检测弓形虫特异性抗体以来，不断加以改进，目前已用于IgG、IgM、CAg、CIC等的检测[5]， IgM抗体常用于急性感染，而IgG抗体检测结果才能反映既往感染情况。本试验采用的就是间接ELISA法测定不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫IgG抗体。

从阳性百分比结果可以看出，各类恶性肿瘤患者弓形虫阳性率高于正常人，且与正常对照组有显著差异(P<0.05) 。这种结果与国内外报道一致[6，7]。弓形虫是一种机会致病原虫，正常人体内多为隐性感染,当机体免疫力低下时，使其致病力增强[5]。肿瘤病人免疫力下降，再加上放疗或化疗机体免疫力更低，使原有隐性感染活化，容易合并或诱发弓形虫感染，所以肿瘤患者感染弓形虫的机会增多，这可导致病人病情恶化，预后不佳，甚至死亡。在现代医疗中，恶性肿瘤患者在抗肿瘤治疗过程中而引发的以弓形虫为代表的难治性寄生虫病或机会性寄生虫病的重症化成为一大问题[8]。原因如下： ① 一般认为细胞免疫是抗肿瘤主力, 肿瘤患者主要是免疫功能低下，加之一些肿瘤患者长期接受放疗及肿瘤进行性生长时， 患者的免疫功能受抑制, 这可能是恶性肿瘤患者感染弓形虫几率高的重要原因；② NO 是一种重要的免疫介质, 在抗肿瘤及抗寄生虫感染的免疫中发挥着重要作用。恶性肿瘤患者由于其血清NO 水平低于正常, 其免疫机能低下，不能有效阻止弓形虫的入侵和发病, 从而导致弓形虫的感染率升高[9]。目前, 有关弓形虫感染与恶性肿瘤的研究, 国内外正给以更多的关注 。本试验进一步验证了目前公认的恶性肿瘤与弓形虫病常并存[10]，至于二者之间是否存在因果关系尚需进一步研究。

各种不同的恶性肿瘤中，弓形虫感染阳性率由高到低依次为：皮肤癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、胃癌。肺癌阳性率和正常对照值同刘爱芹等[11]报道。肺癌感染的阳性率接近吴毓东等[12]报道，乳腺癌感染阳性率接近张维真等[13]报道。乳腺癌感染的阳性率远低于国外报道[14]。其他癌症阳性率与国内其他地区的结果均不完全相同[15，16]，这说明不同地方有其不同的规律，估计与不同地理环境及气候条件有一定关系。其他地方皮肤癌感染弓形虫的研究不多，兰州属于高原，紫外线辐射强，再加上空气污染，故给皮肤癌感染弓形虫的研究提供了条件。

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（收稿日期：2007-12-25）

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