苍耳子对宁都黄鸡盲肠大肠杆菌菌落分形特征的影响

材料与方法

1.1试验动物

本试验中95日龄宁都黄鸡由兴国丰硒农业有限公司提供。试验前随机选取20只试验鸡禁食36h，自由饮水。

1.2样品采集与分离

将60只鸡分成3组，空白组10只，试验组5组（分别饲喂日粮中添加苍耳子0.5%、1%、1.5%、2%）。空白组饲喂正常未添加任何中药与抗生素的全价配合日粮，试验组饲喂按比例加入苍耳子的日粮，连续饲喂7d。采集盲肠内容物。记录样本重量，-70°C保存;经充分研磨，加入PBS混洗静置，收集过滤产物沉淀10min，取上清1.5mL的过滤液离心（4000r，6min）。取沉淀物，加入1mLPBS，振荡混匀。

1.3大肠杆菌培养

将制备好的混悬液分别培养在PDA平板中，于37°C温度下培养7d，每个处理设5个重复。

1.4菌落测量

用扫描仪扫描后，输出各个处理的菌落图形，所得图形进行以下测量：①按常规方法测量菌落直径（cm）。②用计盒法测量菌落图形，以M（mm）为边长的正方形格覆盖各菌落图形，测得图形覆盖的非空方格数N（M），每个边长重复测量3次，取平均值。每个处理测3～5个菌落。对不同Mi（i=1，……m，将得到m个不同N（m）值。设N-M-D，则用最小二乘法对（lnM1，lnN（M））作一元线性回归，回归直线斜率的负值即为分形维数D（1<D<2）。

2结果与分析

2.1菌落分形特征

图1分别为大肠杆菌在不同处理组中方格边长M和方格数N（M1）的双对数关系图，可知其均有明显的线性关.系。在不同处理组的相关系数均很高，达98%以上，见表1。因此，大肠杆菌的菌落在各处理组下都有明显的分形特征，按分形理论计算要求，菌落分形度量可用计盒法进行，所得数据真实可靠，可准确反映菌落的分形特征。

2.2大肠杆菌在不同处理中的菌落分形维数

大肠杆菌菌落的分形维数随着处理组苍耳子浓度的提高而逐渐降低，见图2。分形维数的变化趋势与菌落的发展一致。由此趋势可判断，随着苍耳子浓度的增加，大肠杆菌的增长繁殖受抑制，其菌落发育越慢，分形维数降低，见图3。

2.3分形维数与菌落直径

不同分组的菌落，其分形维数与菌落直径的大小密切相关。但菌落的分形维数并不都与菌落直径呈正相关，如1.5%与2.0%组分形维数呈显著性减小，而直径变化不显著。由此可判断，当用菌落直径不能反映出2种真菌的菌落特征时，可用分形维数进行比较，虽然菌落的形状基本是有规律的，但并非完全符合欧氏几何中的规则形状，因此用分形维数结合菌落直径量化菌落特征比传统方法更科学，更能反映特殊性差异。

3讨论与结论

本试验通过对添加苍耳子各处理组的宁都黄鸡盲肠中大肠杆菌菌落分形维数的计算，表明随着苍耳子添加量的增加，盲肠中大肠杆菌的量呈减少趋势，分形维数随日粮添加苍耳子的量变化而变化，随着苍耳子添加量的增加，分形维数变小。在所有处理组中，不同处理组的大肠杆菌的分形维数不同，说明分形維数受大肠杆菌生长发育环境中苍耳子所含抗菌消炎成份影响较大。不同处理组的菌落分形维数还与菌落直径有关。大肠杆菌在不同处理组中其分枝特性与发育速度有差异，仅用菌落直径大小不能准确反映差别。在本试验中，分形维数能很好地反应菌落在不同苍耳子添加水平下的生长发育差异。因此，日粮中添加苍耳子能有效抑制宁都黄鸡消化道大肠杆菌的增长与繁殖，用分形维数的方法可有效定量描述大肠杆菌的菌落的差异特征。

参考文献

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