黄龙尾药材薄层色谱鉴别

材料

FA1104型0.1mg电子分析天平（上海上平仪器公司）;JP250YHE型超声波清洗器（南京垒君达超声电子设备有限公司）;硅胶G板（青岛海洋化工厂）。正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿均为分析纯，水为灭菌注射用水;三批黄龙尾试验样品分别采自昆明谷律（A20090801），大理清碧溪（B20090818）、楚雄罗茨（C20090709），经云南中医药大学杨树德教授鉴定为黄龙尾。

2 方法与结果

2.1.1 系统预试验 文献报道，黄龙尾（Agrimonia pilosa Ledeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.）主要含有黄酮，鞣质和酚类成分，黄酮类有槲皮素、芦丁、儿茶素等;鞣质类有鞣花酸-4-O-β-D-吡喃木糖苷，鞣花酸等;酚类有仙鹤草酚等。此外，还有三萜皂苷，酯类成分。根据化学成分研究报道再通过化学成分系统预实验，结果显示鞣质、酚性成分和黄酮是黄龙尾主要的化学成分[3-7]。

2.1.2 薄层色谱展开系统筛选 根据文献资料和预试验结果，按黄龙尾药材所含鞣质以及酚性成分研究制定薄层色谱鉴别方法。小极性部分展开系统优选：环己烷-乙酸乙酯（10：1;5：1;3：1），环己烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-甲醇（20：1;15：1;10：1），三氯甲烷-甲醇-甲酸（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-水（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（20：1：0.1：0.1）上行展开;大极性部分展开系统优选：三氯甲烷-甲醇（3：1;2：1;1：1），三氯甲烷-丙酮（1：1），正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上层），三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10，下层），三氯甲烷-乙醇（（3：1;2：1;1：1），上行展开。

2.1.3 供试品提取方法优化 供试品溶液制备分别采用了以下8种方法进行筛选和优化。方法1：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法2：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法3：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法4：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法5：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法6：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法7：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液;方法8：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。

对照物质的选用 目前尚无鉴别该药材专属性对照品，故鉴别项目中选择对照药材为对照物质，照供试品溶液的制备方法制备对照药材溶液。

对照药材溶液制备：小极性部分：取黄龙尾对照药材1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

大极性部分：取黄龙尾对照药材1 g，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.4 检视方法选择 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点清晰;喷以三氯化铁试液，置日光下检视，置紫外光灯（254nm+365nm）下检视结果见表1。

2.1.5 方法耐用性考察

2.1.5.1 不同厂牌的薄层板 硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）;硅胶G薄层板（青岛美高化工有限公司）;硅胶G薄层板（烟台信德化工有限公司）。

2.1.5.2 点样方式点样量 点样方式为接触点样;点样量为1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL、8 μL。

2.1.5.3 温度及相对湿度的影响 按照试验所得薄层色谱条件，考察本品在温度10～30℃、相对湿度为35%～80%展开时，对薄层色谱结果的影响。结果表明，在上述温度、相对湿度范围内对该薄层色谱结果无明显影响。

2.1.5.4 预平衡的影响 按照试验所得薄层色谱条件，考察未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展开，对薄层色谱结果的影响。结果表明，未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展开，所得斑点的分离度均较好，因此，为了简化操作程序，采用未平衡展开。

2.1.5.5 重复性 不同产地的3批样品的检测结果表明，该方法具有重复性。

2.2 结果 试验表明，小极性部分：采用方法8制备供试品溶液，硅胶G薄层板，点样量2 μL，以三氯甲烷-甲醇（20：1）为展开剂，喷以含有10%硫酸乙醇试液，在105℃烘烤至斑点清晰.

大极性部分：试验表明，采用方法3制备供试品溶液，硅胶G薄层板，点样量2μl，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上层）为展开剂，喷以三氯化铁试液后置日光下检视，所得薄层色谱斑点清晰，分离较好。

3 讨论

根据黄龙尾为所含化学成分的不同，将该药材的薄层色谱鉴别分为小极性部分和大极性部分两个段来鉴别;两个极性段用所优选的方法鉴别，分离效果好，斑点清晰，有较好的鉴别意义。本研究对黄龙尾的质量标准控制和薄层色谱鉴别提供了科学依据。

参考文献：

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（收稿日期：2019-06-03）