固相萃取—气相色谱法测定小麦粉中六六六和滴滴涕残留量

材料与方法 1.1 材料

1.1.1 主要仪器。

GC-2014C气相色谱仪附电子捕获检测器（日本岛津国际贸易有限公司）；RPD1-QTSXR10260数控型超声波清洗仪[西化仪（北京）科技有限公司]；TDL-60B低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；QT-1旋涡混合器（河南郑州南北仪器设备有限公司）；NWUV 超纯水仪（上海康雷分析仪器有限公司）；Perten3100实验磨[波通瑞华科学仪器（北京）有限公司]；RV 10 Control V旋转蒸发仪（德国IKA，广东广州仪科实验室技术有限公司）。

1.1.2 试剂与药剂。六六六、滴滴涕混合标准溶液（生产批号：201603），浓度为50 μg/mL，包括：α-六六六（α-BHC）、β-六六六（β-BHC）、γ-六六六（γ-BHC）、δ-六六六（δ-BHC）、滴滴伊（p.p′-DDE）、o.p′-滴滴滴（o.p′-DDD）、p.p′-滴滴滴（p.p′-DDD）、p.p′-滴滴涕（p.p′-DDT），购自农业部环境科研监测所；石油醚（30～60 ℃）、石油醚（60～90 ℃）均为分析纯（四川成都市科龙化工试剂厂）；环己烷、异丙醇均为色谱纯（天津市化学试剂研究所）；二氯甲烷为色谱纯（天津市光复精细化工研究所）；乙腈、正己烷、丙酮、甲醇均为色谱纯（赛默飞世尔科技中国有限公司）；试验用水为一级水。

CarbonNH2 Cartridges固相萃取柱（Waters，1 g/6 mL）；Bond Elut FI固相萃取柱[安捷伦科技（中国）有限公司，500 mg/6 mL]。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件。色谱柱：HP-1型弹性石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；进样口温度：250 ℃；检测器温度：300 ℃；进样方式：不分流；载气：高纯氮气（纯度不小于99.999%），流量为1.0 mL/min；进样量：1 μL；升温程序：初始90 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至170 ℃，保持1 min，再以1 ℃/min升至180 ℃，最后以5 ℃/min升至215 ℃，保持5 min。

1.2.2 样品前处理方法。

1.2.2.1 样品提取。称取2.00 g小麦粉于15.0 mL离心管中，加入5.0 mL乙腈，涡旋混匀，超声提取5 min，5 000 r/min离心5 min，转移上清液到50.0 mL浓缩瓶中，再加5.0 mL乙腈重复1次，合并2次上清液于50.0 mL浓缩瓶中，减压浓缩后用2.0 mL乙腈溶解试样，涡旋混匀，待净化。

1.2.2.2 净化。

将CarbonNH2 Cartridges固相萃取柱先用8.0 mL乙腈-甲苯（3+1）活化，待柱中液面为2 mm时上样（该过程不要使固相萃取柱干涸），用4.0 mL乙腈-甲苯（3+1）洗脱液洗脱6次，一并收集溶液于50.0 mL浓缩瓶中，50 ℃减压浓缩至近干，加入2.0 mL正己烷，经0.45 μm滤膜过滤，待上机测定。

1.2.3 标准曲线的配制。

将1 mL/支、浓度为50.000 μg/mL的六六六、滴滴涕混合标准溶液用正己烷稀释并定容到10.0 mL的容量瓶中，得5.000 μg/mL六六六、滴滴涕混合标准使用液；分别吸取0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.40、0.80 mL 5.000 μg/mL六六六、滴滴涕混合标准使用液于10.0 mL容量瓶中，稀释定容，即得浓度为0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.400 μg/mL的六六六、滴滴涕混合标准系列。

1.2.4 计算公式。

采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性，采用外标法定量。

W=C×V×1 000/（m×1 000）

式中，W—样品中六六六、滴滴涕的含量（mg/kg）；C—从标准曲线得到的六六六、滴滴涕的浓度（μg/mL）；V—定容体积（mL）；m—样品质量（g）。

2 结果与分析

2.1 样品前处理方法的优化

2.1.1 提取方式的选择。

在样品的前处理步骤中，振荡提取、均质提取和超声提取是3种常用的提取方式。其中，振蕩提取能够使提取液充分浸润样品，但是消耗时间较长，一般需要40～60 min才能取得较好的效果。试验以快速提取为原则，比较了均质提取和超声提取的差异，2种方式以超声提取在六六六、滴滴涕的加标回收率较好。故选择超声提取，提取时间为5 min，重复2次。

2.1.2 提取溶剂的选择。

目前，有机氯农药的提取溶剂一般采用丙酮、乙腈、石油醚、正己烷等[1-2，4-7]。试验比较了丙酮、石油醚、正己烷、乙腈的提取效果。结果表明，丙酮极易挥发，提取效果较差；石油醚和正己烷提取效果相当，但许多非极性杂质易被同时提取，使得样品加标回收的色谱图杂峰较多；乙腈作为提取溶剂，渗透性好，而且不易挥发，稳定性好，样品的加标回收率也很好。故选择乙腈作为提取溶剂，提取体积为5 mL，重复2次提取。

2.1.3 固相萃取柱的选择。

CarbonNH2柱上层是活性炭，下层是氨基能够和杂质中的相关基团形成氢键而去除干扰物质，脱色效果明显[4]。Florisil固相萃取小柱是正相萃取，其中的填料对样品中的色素等极性杂质有很强的吸附能力[6]。试验分别考察这2种固相萃取柱对六六六、滴滴涕的加标回收率。结果表明，使用CarbonNH2固相萃取柱，六六六、滴滴涕的加标回收率在80.21%～113.41%；而使用Florisil固相萃取柱，六六六、滴滴涕的加标回收率在71.18%～93.72%。故选择选用CarbonNH2固相萃取小柱作为固相萃取柱。

2.1.4 洗脱溶剂的选择。

洗脱剂的选择关系到样品加标回收率的结果，若洗脱剂极性太强，会洗下一些强保留的杂质组分；若洗脱剂极性太弱，则部分目标组分难以被完全洗脱下来[2]。试验考察了4种洗脱剂，分别是丙酮-正己烷（1+9）、乙腈-甲苯（3+1）、丙酮-二氯甲烷（1+5）、乙酸乙酯-正己烷（1+9）。

由图1可知，乙腈-甲苯洗脱液回收率最高，正己烷-丙酮洗脱液次之，而丙酮-二氯甲烷和乙酸乙酯-正己烷洗脱液的回收率相对较低，故选择乙腈-甲苯（3+1）作为洗脱液。

2.2 方法的性能指标

2.2.1 方法的检出限。在“1.2.1”的条件下，六六六、滴滴涕农药取得良好的分离效果，见图2。按照“1.2.3”配制好的系列混合标准溶液测定，以浓度（X）为横坐标峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数r，以3倍信噪比计算检出限，以10倍信噪比计算定量下限，结果见表1。

2.2.2 方法的回收率和精密度。

取空白小麦粉样品2.00 g，按照“1.2.2”的方法进行提取，在线性范围内进行了3个水平的添加回收率试验，每个水平测定6个平行样品。由表2可知，该方法对六六六、滴滴涕的加标回收率在80.21%～113.41%，相对标准偏差在1.30%～4.33%，方法的精密度和准确度均符合农药残留分析要求。

2.3 样品测定 对宁夏地区生产、流通环节中的97批次小麦粉样品进行测定，其中六六六的残留量在0.006 4～0.032 0 mg/kg，滴滴涕的残留量在0.001 2～0.004 1 mg/kg，均低于GB2763—2014食品中农药最大残留限量中的0.050 0 mg/kg。这说明有机氯农药虽然在我国已禁用多年，但因其在环境的持久性、生物累积性等原因，土壤中较高含量的有机氯农药残留仍可通过富集、转移及植物吸收等途径累积在植物体内，通过食物链进入人体，对人体造成伤害[6]。

3 结论

通过优化试验条件，建立了六六六和滴滴涕8种有机氯农药在小麦粉中同时分析测定的方法。样品采用乙腈超声提取，经过CarbonNH2 Cartridges固相萃取柱净化除杂，乙腈

-甲苯（3+1）洗脫，通过HP-1型弹性石英毛细管色谱柱进行ECD测定。当浓度为0.005～0.400 μg/mL时，六六六和滴滴涕相关性较好。在0.05～0.20 mg/kg的添加水平下，六六六和滴滴涕的平均回收率在80.21%～113.41%，相对标准偏差（n=6）在1.30%～4.33%，检出限在0.10～1.51 μg/kg。该方法灵敏度高、重复性好、回收率高，可用于检测小麦粉中有机氯农药残留。

参考文献

[1] 史晓梅，陈立恒，章晴，等.分散固相萃取-气相色谱法测定大米中六六六和滴滴涕残留量[J].食品安全质量检测学报， 2014，5（4）：1117-1123.

[2] 张海燕.固相萃取-气相色谱法测定甘草中的六六六、滴滴涕含量[J].化学分析计量，2014，24（5）：52-55.

[3] 任朝兴.固相萃取-气质联用法同时测定海水中六六六、滴滴涕、狄氏剂[J].分析仪器，2009（5）：59-61.

[4] 易承学，薛渊，徐红，等.毛细管气相色谱法测定金针菇中16种农药残留[J].食品工业，2015，36（8）：276-279.

[5] 王贵双，高丽华，赵俊平，等.固相萃取-气相色谱-质谱法测定粮谷中17种有机氯和拟除虫菊酯农药残留[J].中国酿造，2010，29（11）：165-167.

[6] 王朝杰，李倩，胡玉霞，等.固相萃取-毛细管气相色谱法测定蔬菜中14种有机氯类农药残留量分析[J].现代农业科技，2016（5）：137-139.

[7] 刘桂宁，强维，钟闱桢，等.固相萃取/毛细管气相色谱法测定肉桂皮中六六六、滴滴涕农药残留量[J].分析测试学报，2014，33（1）：103-107.