基于大鼠应激性胃溃疡寒症模型的吴茱萸各性味组分的药性研究

计划（973）项目（2006CB504708，2013CB531801）；黑龙江省博士后项目（LBH-Z12259）；黑龙江省教育厅科研课题（12531622）；黑龙江省中医管理局课题（ZHY12-2070）；黑龙江中医药大学优秀青年教师支持计划项目（2012RCQ16）

[通信作者] *匡海学，教授，博士生导师，Tel：（0451）87266862，E-mail：hxkuang56@163.com

[作者简介] 孟永海，副教授，Tel：（0451）87266862，E-mail：15845002546@139.com

性与味均是中药功能的高度概括，两者既互不相同，又关系密切，可以将其看作是同一物质基础所展示出来的不同属性的功能。从中药的发展历史来看，四气药性必然存在，然而如何用科学的方法来阐释中药的四气，有关药性归属的判断标准是什么，如何量化，如何建立客观可行的中药四气的评价方法和体系？这些一直是我国中医药学者努力奋斗的目标。基于此，本文在已往吴茱萸各化学拆分组分药味归属研究基础上^[1-3]，以“中药一味一性，一药X味Y性（Y≤X）”的中药性味理论新假说为中心，以中医传统性味评价结果为依据，以与能量代谢、物质代谢相关的重要神经递质和激素为指标考察吴茱萸及其各性味拆分组分的药性归属。探索药味与药性之间的关系，为揭示中药“一味一性”的客观存在提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物 清净级Wistar大白鼠，雌雄各半，体重（200±20） g，合格证号P00102007号，饲养于本校实验动物中心SPF级屏障动物实验室。室内温度20～25 ℃，相对湿度40%～70%，12 h循环照明。动物日常护理及实验条件均符合《中华人民共和国卫生部实验动物环境及设施标准》。

1.2 药物与试剂 实验用吴茱萸各性味拆分组分由课题组自制^[4]，其中辛味组分为“生物碱1组分和20%乙醇洗脱组分”，苦味组分为“生物碱2组分、醇沉组分、95%乙醇洗脱组分以及吴茱萸内酯”^[1]。大鼠多巴胺（DA）酶联免疫检测试剂盒、大鼠五羟色胺（5-HT）酶联免疫检测试剂盒、大鼠去甲肾上腺素（NE）酶联免疫检测试剂盒、大鼠乙酰胆碱酯酶（AChE）酶联免疫检测试剂盒、大鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）检测试剂盒均为美国R&D公司产品。

1.3 仪器 Anthos 2010型酶标仪（奥地利Anthos Labtec公司）；Eppendorff移液器（Eppendorff公司）；涡旋混匀器（美堰市康健医疗器具有限公司）；低温离心机（日本日立公司）。

1.4 分组 取Wistar大白鼠60只，随机分为6组，每组10只。分别设为空白组、模型组、吴茱萸水煎液组、吴茱萸辛味组分组、吴茱萸苦味组分组、挥发油组分组。

1.5 动物模型制备^[5] 吴茱萸水煎液及各拆分组分按人和大鼠体表面积等效剂量折算（0.018）配成质量浓度为生药0.067 5 g·mL^-1的溶液备用，灌胃量为20 mL·kg^-1，相当于生药1.35 g·kg^-1。各组实验动物连续给药7 d（空白组和模型组给予同体积的蒸馏水），造模前，将大鼠禁食48 h，自由饮水，末次给药30 min后，用乙醚轻麻大鼠，将动物仰卧固定于大鼠固定板上，将其下半身置于（20.0±1.0） ℃的冷水，水面齐剑突水平，7 h后将大鼠于冷水中取出并吹干（空白组不造模直接取血）。用乙醚轻麻大鼠经颈总动脉取血，血样静置1 h后高速离心分取血清；打开腹腔，剪下胃，浸泡于1.0%甲醛中20 min，沿胃大弯剪开并展平，用小棉球轻轻将黏膜上的黏液和血块擦掉，观察黏膜损伤程度，游标卡尺测定溃疡指数。

1.6 溃疡指数（UI）测定 按Guth标准^[5]计算溃疡指数（UI）：点状出血为1分，线状出血长度< 1 mm为2分，1～2 mm为3分，2～4 mm为4分，> 4 mm为5分，宽度> 1 mm时分值×2。

1.7 血清中多巴胺（DA）、五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、乙酰胆碱酯酶（AChE）及17-羟皮质类固醇（17-OHCS）含量测定 分离血清，依据试剂盒使用说明书进行DA等指标的检测^[6]。

1.8 统计学方法 所有数据以±s表示，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 吴茱萸性味拆分组分对应激型胃溃疡模型大鼠胃黏膜的影响 组织形态学观察：冷水对大鼠应激刺激后，取大鼠胃肉眼观察，见图1，可见模型组大鼠胃底部黏膜大片瘀血、出血严重，溃疡面较多；吴茱萸水煎液组、吴茱萸苦味组分组和挥发油组分组大鼠胃黏膜出血明显减少，且溃疡部位面积缩小；吴茱萸辛味组对溃疡改善不显著。胃黏膜病理切片经HE染色，光学显微镜观察，见图2，可见模型组大鼠胃黏膜上皮有缺损，胃底腺上皮细胞变性、坏死，黏膜层和黏膜下层偶见红细胞及含铁血黄素颗粒，黏膜下层偶见中性白细胞浸润；吴茱萸水煎液组、吴茱萸苦味组分组和挥发油组分组，可见大鼠胃底腺上皮细胞较好，黏膜下层中性粒细胞浸润程度较轻；而吴茱萸辛味组分组呈现不同程度的黏膜充血、糜烂及炎细胞浸润。

对模型大鼠胃黏膜溃疡指数的影响：以溃疡指数为指标衡量各组分的影响效果，结果见表1，吴茱萸水煎液组（P<0.01）、苦味组分组（P<0.05）、挥发油组（P<0.05）与模型组相比较有显著性差异，表明吴茱萸水煎液组、苦味组分组、挥发油组具有较明显的抗冷水应激引起的胃溃疡作用。

图1 经肉眼观察各组模型大鼠胃黏膜的损伤图

Fig.1 The original drawings visually observed of gastric mucosal injury in each model groups rats

图2 经HE染色光镜观察各组模型大鼠胃黏膜的损伤图（×400）

Fig.2 The original drawings by HE staining light microscopy observed of gastric mucosal injury in each model groups rats（×400）

2.2 吴茱萸各性味拆分组分对冷水应激实验大鼠血清中的中枢神经递质含量影响 对大鼠血清DA含量的影响^[7-8]：模型组与空白组相比，模型大鼠血清DA含量呈现显著降低趋势（P<0.01）。吴茱萸水煎液组、挥发油组、辛味组、苦味组与空白组相比均具有显著性差异（P<0.01），表明各给药组均没有显著缓解水应激引起的大鼠血清DA含量降低的趋势；与模型组相比，吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组均具有上升趋势但无显著性差异，表明吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组对于冷水应激造成的大鼠血清DA含量降低均具有一定的升高作用。挥发油组无升高DA含量的趋势，见表2。

对大鼠血清5-HT含量的影响^[7-9]：模型组与空白组相比，模型大鼠血清5-HT含量具有显著升高趋势（P<0.01），表明造模成功。除挥发油组（P<0.01）外，吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组与空白组相比均无显著性差异，表明吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组可显著抑制水应激引起的大鼠血清5-HT含量的升高；除挥发油组外，吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组与模型组相比，5-HT含量明显下降且均具有显著性差异（P<0.05），表明吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组对于冷水应激引起的大鼠血清5-HT含量升高具有较强的抑制作用，而挥发油组则无此作用，见表2。

对大鼠血清NE含量的影响^[7-9]：模型组与空白组相比，模型大鼠血清中NE含量变化趋势不明显，无显著性差异，说明冷水应激刺激不能使大鼠血清中NE含量产生明显变化。吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组、挥发油组与空白组和模型组相比，均无显著性差异，表明吴茱萸各性味拆分组分对大鼠血清NE影响不明显，见表2。

对大鼠血清AChE含量的影响^[7-10]：模型组与空白组相比，模型大鼠血清中的AChE含量显著降低（P<0.05）。吴茱萸水煎液组、挥发油组、辛味组、苦味组与空白组相比，AChE含量亦均显著性降低，表明各给药组均不能缓解冷水刺激引起的大鼠血清AChE含量的降低。除辛味组外，吴茱萸水煎液组（P<0.05）、挥发油组（P<0.01）、苦味组（P<0.01）与模型组相比，其AChE含量的降低均具有显著性差异，表明吴茱萸水煎液组、挥发油组、苦味组对于冷水应激引起的大鼠血清中AChE含量降低不仅无升高作用，反而使其更进一步降低，见表2。

2.3 吴茱萸各性味拆分组分对冷水应激实验大鼠血清中17-OHCS含量的影响^[7-8，11] 模型组与空白组相比，模型大鼠血清中17-OHCS的含量显著降低（P<0.05）；与空白组相比，除辛味组分（P<0.05）外，吴茱萸水煎液、苦味、挥发油组分均无显著性差异，表明吴茱萸水煎液、苦味、挥发油组分可缓解水应激引起的大鼠血清17-OHCS含量降低趋势，见表2。

DA，5-HT，NE，AChE，17-OHCS等指标线性回归方程及相关系数见表3。

2.4 吴茱萸各性味拆分组分对冷水应激实验大鼠各脏器指数的影响^[12] 冷水应激模型大鼠在刺激过后各脏器指数没有发生明显改变，各给药组大鼠脏器指数与空白组及模型组比较，均未见显著性差异。

3 结论与讨论

早在20世纪80年代初梁月华等^[4]针对寒热证及中药寒热药性等方面进行了大量研究，后来很多学者也开展了相关领域的研究。结果表明，在寒凉药诱导的大鼠寒症模型中，中枢神经递质如NE，DA含量降低而5-HT含量增高，经温热药灌胃后可逆转以上病理变化；同时温热药如附子、肉桂、干姜等可使动物脑内去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）含量逐渐增多，并维持在较高水平，且作用缓慢而持久。

冷水应激大鼠由于受到冷水及束缚刺激，从实验动物外观（瘫软无力、几乎无活动能力）及刺激类型（20 ℃冷水浸泡，7 h）可判断为典型的寒症模型；从实验结果看，大鼠血清中DA，AChE与空白组比较，其含量明显下降，而5-HT则表现为明显上升趋势。这些结果与以往一些学者的研究结果基本一致。考察吴茱萸及其各性味拆分组分对模型大鼠血清中DA，5-HT，NE及AChE含量的影响发现：与模型组相比，大鼠血清中DA含量，吴茱萸水煎液组、辛味组分及苦味组分虽然没有显著性差异，但发现有明显的上升趋势，表明吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组对于冷水应激造成的大鼠血清中DA含量下降均具有一定的升高作用；在5-HT的含量指标上，与模型组相比，吴茱萸水煎液组、辛味组分及苦味组分具有显著性下降趋势，表明吴茱萸水煎液组、辛味组、苦味组对于冷水应激造成的大鼠血清中5-HT含量升高均具有较强的降低作用。这些结果同样与前人研究热性药物的变化趋势基本一致，因此，可初步判断吴茱萸及其各性味组分应归属为温性。而各给药组对模型大鼠NE及AChE含量影响均不明显，有待于进一步探讨。

寒性药和热性药可通过对自主神经功能的调整，纠正机体交感-肾上腺功能不平衡的状态。温热药（附子，肉桂，干姜为主的方药）可以纠正寒证患者低下的交感-肾上腺系统功能活动，自主神经平衡指数升高^[11-12]。考察冷水刺激模型大鼠血清中17-OHCS含量的影响发现，模型大鼠血清中17-OHCS明显下降，表明冷水刺激使大鼠交感-肾上腺系统功能活动下降表现为典型的寒症模型。考察吴茱萸及其各性味拆分组分对模型大鼠血清中17-OHCS含量的影响发现，对大鼠血清中17-OHCS含量，与模型组相比，吴茱萸水煎液组、辛味组分及挥发油组分虽然没有显著性升高作用，但有明显的上升趋势，表明吴茱萸水煎液组、辛味组、挥发油组对于冷水应激造成的大鼠血清中17-OHCS含量下降均具有一定的上升作用，可在一定程度上纠正寒证大鼠低下的交感-肾上腺系统功能活动。以此亦可判断吴茱萸水煎液组、辛味组、挥发油组应归属为温性。

综上所述，吴茱萸及各性味组分可在不同程度上纠正或缓解水应激寒症大鼠血清中与中枢神经递质及能量代谢相关的递质、酶类的含量，因此，判断吴茱萸及各性味组分的药性应归属为温性。

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Study on drug properties of components in Euodiae Fructus based on rat

stress gastric ulcer model with cold syndrome

MENG Yong-hai， WANG Qiu-hong， YANG Bing-you， YANG Zhi-xin， WANG Yan-yan， WANG Zhi-bin， KUANG Hai-xue（Key Laboratory of Northern Medicine Basis and Application Research at Provincial and Ministerial Levels，

Heilongjiang Key Laboratory of Pharmacodynamic Material Base of Traditional Chinese Medicines and Natural

Drugs under Ministry of Education， Heilongjiang University of Chinese Medicine， Harbin 150040， China）

[Abstract] Objective： To clarify drug properties of components in Euodiae Fructus. Method： The rat cold syndrome model was induced by cold water stress method. The content of neurotransmitters sand hormones such as DA， 5-HT， NE， AChE and 17-OHCS in serum of model rats were taken as the indexes to evaluate drug properties of components in Euodiae Fructus. Result： Euodiae Fructus and its components could correct or relief the content of energy metabolism and substance metabolism-related neurotransmitters sand hormones in serum of model rats with water-stressed cold syndrome. Conclusion： Euodiae Fructus and its components are proved to show hot property.

[Key words] cold syndrome model； Euodiae Fructus； component； drug property

doi：10.4268/cjcmm20140326

[责任编辑 张宁宁]