注射用甲钴胺含量测定方法分析

材料

1.1 仪器。在采用高效液相色谱检测法中，主要应用的仪器设备是高效液相色谱仪，主要型号为SPD-10Avp型，能够对紫外线进行检测的可见-紫外检测器，由日本岛津制造所生产，同样由日本岛津制造所生产的可见紫外分光光度计是紫外分光光度法实验中需要的主要设备，色谱柱的规格为C18柱，200mm×4.6mm，生产厂家为迪马公司。

1.2 材料。在实验中主要应用的对照品材料是由中国药品生物制品检定所提供的甲钴胺对照品，由邯郸四友生物医药有限公司生产的乙腈，还有注射用的甲钴胺，主要是在制剂室生产获得的。

2 实验方法

本实验主要采用的方法是高效液相色谱法对注射用甲钴胺的含量进行测定，具体的实验操作步骤如下。首先是要对检测波长进行测定，在检测的过程中应该注意避光操作，因为甲钴胺遇光会出现分解的现象，从材料中取出适当的甲钴胺原料，以及注射用的甲钴胺适量，还有满足实验要求的适当辅料，在其中加入甲醇，得到溶液。每1mL中含有20μg的溶液，将高效液相色谱仪的波长调整到190mm至400mm的范围内，采用紫外线的方式进行扫描，能够得到最大吸收的范围，甲钴胺原料在266mm时获得最大的吸收，样品在341mm时得到最大吸收，辅料在343mm时获得最大吸收，因此能够确定本样品在266mm时是最为合适的检测波长。

本实验中主要的色谱条件如下，选取十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，流动相为乙腈以及每升0.05mol的磷酸二氢钾，采用每升1mol的磷酸调制而成，其酸碱值为3.3，保证主峰的保留时间适当，具备较好的峰形。紧接着对含量进行测定，主要的检测方法是先避光取出适量的本品，加入流动相，制成供试品溶液，其中每毫升的供试品溶液中含有0.5mg的甲钴胺溶液，另外取适当的甲钴胺对照品，在进行精密的称量以后，按照相同的方法进行测定，按照外标法对峰面积进行计算，能够得出相应的结果，根据高效液相含量的测定方法对样品进行检测，能够获得如下的检测结果。见表1。

紧接着采用紫外分光光度法对注射甲钴胺的含量进行检测。在检测波长的确定过程中，同样是采用上述相同的方法，紧接着线性关系进行测试，测试的过程中选择避光操作的方式，先对甲钴胺对照品进行精密的称量，在100mL的容量瓶中加入21.38mg的对照品，然后在其中加入甲醇进行溶解以及稀释，将其摇晃均匀以后达到指定的刻度位置上，再精密的称取溶液5mL，将其放置在50mL的量瓶中，在其中加入甲醇溶液进行溶解并且稀释到指定的刻度位置上，均匀的进行摇晃，分别取出1.0、3.0、5.0/7.0以及10.0mL的溶液放置在5个相同的10mL的量瓶中，使用流动相对其进行稀释，达到指定的刻度位置上以后，均匀的摇晃，根据参照含量的要求进行检测。根据紫外分光光度法规定的检测要求，能够获得检测样品，具体的检测结果见表2。

3 讨论

从制剂室反馈的信息，制剂室按100%投料。这样，高效液相色谱法的检测结果更接近与实际投料量，且通过上述试验可以看出，紫外分光光度法的稳定性，重复性的RSD均接近于2%。不如高效液相法好。另外紫外分光光度法的取样量较少，检测浓度低，容易受干扰，也是造成检测不够准确的重要原因。因此，注射用甲钴胺的含量测定方法还是用高效液相色谱法较好。

甲钴胺是一种内源性的辅酶B12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用。体外研究表明，甲钴胺可促进培养的大鼠组织中卵磷脂的合成和神经元髓鞘形成，适用于周围神经病变。动物实验表明，本品比氰钴胺易于进入神经元细胞器，参与脑细胞和脊髓神经元胸腺嘧啶核苷的合成，促进叶酸的利用和核酸代谢，且促进核酸和蛋白质合成作用较氰钴胺强；能促进轴突运输功能和轴突再生，使链脲霉素诱导的糖尿病大鼠坐骨神经轴突骨架蛋白的运输正常化；对药物引起的神经退变，如阿霉素、丙烯酰胺、长春新碱引起的小鼠轴突退变及自发高血压大鼠神经疾病，具有抑制作用；能使延迟的神经突触传递和神经递质减少恢复正常，通过提高神经纤维兴奋性，恢复终极板电位诱导，使饲以胆碱缺乏饲料大鼠的脑内乙酰胆碱恢复到正常水平。

甲钴胺注射液，适应症为用于周围神经病。因缺乏维生素B12引起的巨红细胞性贫血的治疗。甲钴胺易转移至神经细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成。甲钴胺较氰钴胺更易转移入大白鼠的神经细胞的细胞器。在小鼠的脑细胞和脊髓神经细胞的实验中，参与由脱氧尿嘧啶核苷合成胸腺嘧啶核苷的过程，促进叶酸的利用和核酸的代谢。而且，甲钴胺比钴酰胺更能促进大鼠的核酸和蛋白质的合成。促进轴索内输送和轴索的再生。在由给与链脲菌素引起糖尿病大白鼠模型的坐骨神经细胞，可使轴索结构蛋白质的输送正常化。对由阿霉素、丙烯酰胺、长春新碱引起的药物性神经障碍（大白鼠、兔）以及轴索变形小白鼠模型，自然发病糖尿病大白鼠的神经障碍在神经病理学、电生理学上可抑制变性神经的出现。此外还能促进正红血母细胞的成熟、分裂、改善贫血血像。缺乏维生素B12可能导致巨红细胞性贫血，本药促进在骨髓中核酸的合成及正红血母细胞的成熟、分裂、增加红细胞的产生。本药可迅速恢复因B12缺乏而降低的大白鼠红细胞数、血红蛋白、血细胞比容值。

参考文献

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