血红素氧化酶1启动因子基因多态性与冠心病及其患者支架术后生存质量的相关性研究

[摘要]目的 研究血红素氧化酶1（HO-1）启动因子基因多态性与冠心病患者支架术后生存质量的相关性。方法 临床纳入58例我院2015年8月～2016年8月收治的冠心病患者作为冠心病组，所有患者均行支架手术干预治疗。另选取58例同期来我院进行健康体检的志愿者作为对照组。对两组研究对象进行HO-1启动因子基因多态性检测，观察两组HO-1启动因子基因多态性分布情况。对两组生存质量进行观察，分析HO-1启动因子基因多态性与冠心病患者的相关性。结果 冠心病组患者与对照组在SS、SL、LL基因型以及S、L等位基因分布上差异均有统计学意义（P<0.05）；而在长、短基因型上分布差异无统计学意义（P>0.05）。冠心病组患者生存质量评分（QOL）、日常生活质量评分（ADL）评分均明显低于对照组，差异有统计学意義（P<0.05）。SS、SL基因型及S等位基因与冠心病患者生存质量成明显负相关，P<0.05；LL基因型及L等位基因与冠心病患者生存质量成正相关，P<0.05。结论 冠心病患者支架术后生存质量与患者HO-1启动因子基因多态性密切相关，携带SS、SL基因型及S等位基因的患者一般生存质量较好，而LL基因型及L等位基因的患者生存质量较差。

[关键词]血红素氧化酶1；基因多态性；冠心病；生存质量；相关性

[中图分类号] R541.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）07（a）-0033-03

Study on the correlation between the gene polymorphism of heme oxygenase-1 promoter and the coronary heart disease and the quality of life after stenting

ZHANG Ying-xi1 CHEN Jun-yu2 CHEN Rong-song2 CHEN Song-ming2 YANG Bao-jun2

1.Department of Critical Medicine，the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China；2.Department of Cardiology，the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China

[Abstract]Objective To study the correlation between the gene polymorphism of heme oxygenase-1（HO-1） promoter and the quality of life after stenting in the patients with coronary heart disease.Methods 58 patients with coronary heart disease who were admitted to our hospital from August 2015 to August 2016 were clinically eolled.They were assigned to the coronary heart disease group.All patients were given the intervention of stenting.Another 58 volunteers who were given physical examination in our hospital during the same period of time were selected as the control group.The distribution of HO-1 promoter gene polymorphism was observed in the two groups of subjects.The quality of life was observed in both groups，and the correlation between gene polymorphism of HO-1 promoter and the patients with coronary heart disease was analyzed.Results There were significant differences in the distribution of SS，SL，LL genotypes and S，L alleles between the patients in the coronary heart disease group and the control group（P<0.05）；while the distribution of long and short genotypes was not different（P>0.05）.The scores of QOL and ADL in the coronary heart disease group were significantly lower than those in the control group（P<0.05）.SS，SL genotypes and S allele were significantly negatively correlated with the quality of life of patients with coronary heart disease（P<0.05）；LL genotype and L allele were positively correlated with the quality of life of patients with coronary heart disease（P<0.05）.Conclusion The quality of life of patients with coronary heart disease after stenting is closely correlated to the HO-1 promoter gene polymorphism.Patients carrying with SS，SL genotypes and S allele generally have a better quality of life，while the patients carrying with LL genotype and L allele have a poorer quality of life.

[Key words]Heme oxygenase-1；Gene polymorphism；Cor？鄄onary heart disease；Quality of life；Correlation

冠心病是临床常见的心血管疾病之一，近年来随着我国人口老龄化的加剧，人们饮食习惯和生活习惯的改变，冠心病发生率呈明显上升趋势[1]。冠心病的主要病理特征是冠状动脉粥样硬化，而引起冠状动脉粥样硬化的因素较多，其中基因表达的改变及促进作用是目前研究的热点[2]。近年来研究显示[3-4]，血红素氧化酶1（HO-1）在抗氧化平衡方面具有重要作用，可催化游离血红素降解，起到抗炎、抗氧化作用。有学者发现[5]，HO-1含量与冠心病发病率有密切关系，因此提出HO-1基因的表达可能对冠心病患者預后情况具有密切关系。本文对我院冠心病支架术后患者进行研究，探讨HO-1启动子区（GT）n基因多态性与冠心病支架术后患者生存质量的关系，为临床预防性干预冠心病患者提供理论依据，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取58例我院2015年8月～2016年8月收治的冠心病患者作为冠心病组。纳入标准：①经冠状动脉造影检查和诊断符合冠心病诊断标准的患者[6]；②符合支架术治疗手术指征的患者；③自愿参加本研究并签字同意的患者；④预计生存期超过1年的患者。排除标准：①介入治疗（PCI）手术失败的患者；②合并其他严重疾病（如先天性心脏病、心包疾病、肾功能不全等）对研究有影响的患者；③认知功能障碍、精神异常等无法配合研究的患者。另选取58例同期来我院进行健康体检的志愿者作为对照组。冠心病组男性31例，女性27例；年龄38～86岁，平均（61.2±4.5）岁；合并症：高血压26例，糖尿病18例，高血脂9例。对照组男性30例，女性28例；年龄35～85岁，平均（61.4±4.2）岁；合并症：高血压25例，糖尿病16例，高血脂10例。两组患者上述资料（性别、年龄以及合并症等）差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1 HO-1启动子区（GT）n基因多肽检测

1.2.1.1单核细胞分离 取研究对象晨静脉血5 ml，肝素抗凝，混合Hank′s稀释液稀释1倍，加5 ml单个核细胞分离液，离心机离心旋转，重复3次稀释、离心、洗涤后沉淀物为单核细胞，DMEM冰冻液-80℃保存备用。

1.2.1.2 DNA提取 采用Qiagen公司提供的基因组抽提试剂盒进行DNA提取，严格按照试剂盒说明书进行操作，采用盐析法对所分离出的单个核细胞进行基因组DNA提取。

1.2.1.3反应引物设计 下载HO-1基因启动子全长序列，利用primer5.0软件合成HO-1基因PCR反应产物，并校对引物。正向序列：5"-GGATTCCAGCAGGTGACATT-3"；反向序列：5"-ACAGCTGATGCCCACTTTCT-3"。

1.2.1.4荧光标记引物 采用PCR反应体系进行标记，4 μl体系进行PCR反应，反应条件：95℃预变5 min，分别在95℃、55℃以及72℃下各进行30 s预变，进行10个循环；在89℃、55℃以及72℃下各进行30 s预变，进行25个循环；72℃下延伸10 min。

1.2.1.5毛细管电泳 PCR纯化后采用美国ABI公司生产的ABI 3730XL进行毛细管电泳，收集毛细管电泳荧光信号，将原始电泳信号变为峰图文件进行分析。

1.2.1.6基因分型 对所得到的峰图文件进行基因分型，根据每个样本在HO-1启动子区（GT）位点的重复次数进行基因型的划分。

1.2.2生存质量评估方法

采用生存质量评分（QOL）[7]以及日常生活质量评分（ADL）[8]评估两组对象生存质量情况，QOL满分60分，ADL满分100分，分值越高，两组患者生存质量越高。

1.3观察指标

观察两组患者HO-1启动子区（GT）n基因型多态性分布情况，观察两组患者支架术后生存质量情况，分析HO-1启动因子基因多态性与术后生存质量的相关性。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，采用Spearman进行相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 HO-1启动子区（GT）n基因型多态性分布情况

冠心病组患者与对照组在SS、SL、LL基因型以及S、L等位基因分布上差异均有统计学意义（P<0.05）；而在长、短基因型上分布差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2两组生存质量的比较

冠心病组患者QOL、ADL评分均明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

2.3 HO-1启动子区（GT）n基因多态性与冠心病患者生存质量的相关性分析

SS、SL基因型及S等位基因与冠心病患者生存质量呈明显负相关，P<0.05；LL基因型及L等位基因与冠心病患者生存质量呈正相关，P<0.05（表3）。

3讨论

随着医学模式的转变，医学学者已经不仅仅关注患者生存、死亡等问题，更多学者开始关注患者的生存质量问题[9]。目前生存质量已经成为众多疾病预后的重要指标，有效反映了疾病预后的治疗效果[10]。既往研究显示[11-13]，冠心病是由众多因素引起的心血管疾病，而众多因素对患者预后影响也较大。近年来人们不仅仅关注吸烟、饮酒等表面上的影响因素，对于基因对冠心病患者的影响成为当下研究的热门话题。

HO-1是HO的一种同工酶，可有效起到抗氧化、抗应激以及抗炎的作用。目前研究发现[14]，先天性缺乏HO-1的人群容易发生冠状动脉粥样硬化，因此认为HO-1的表达对冠状动脉发病率及预后有一定影响。HO-1基因启动子区（GT）n存在基因多态性，因此不同基因型HO-1表达从而对冠心病患者预后的影响成为人们关注的重点[15]。本文结果显示，HO-1基因型存在SS、SL以及LL三种，等位基因为S和L。在冠心病患者中SS、SL基因型以及S等位基因表达低于正常人群，而LL基因型以及L等位基因表达明显高于正常人群。在生存质量上发现，冠心病患者QOL、ADL评分均低于正常人。分析HO-1基因多态性与生存质量的关系发现，SS、SL基因型及S等位基因与冠心病患者生存质量成明显负相关，P<0.05；LL基因型及L等位基因与冠心病患者生存质量成正相关，P<0.05。提示S等位基因可能是冠心病患者支架术后生存质量的保护基因，而L可能为危险基因。

综上所述，冠心病患者支架术后生存质量与患者HO-1启动因子基因多态性密切相关，携带SS、SL基因型及S等位基因的患者一般生存质量较好，而LL基因型及L等位基因的患者生存质量较差。

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（收稿日期：2017-04-14 本文编辑：崔建中）