地衣芽孢杆菌对蛋鸡肠道菌群与形态结构的影响

摘 要：为探讨不同剂量地衣芽孢杆菌对鸡蛋肠道菌群与形态结构的影响，试验选用392日龄健康的海蓝灰蛋鸡360只，随机分为4个组，每个组设6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加1×109 cfu/kg、2×109 cfu/kg、3×109 cfu/kg的地衣芽孢杆菌。结果表明：日粮中添加3×109 cfu/kg的地衣芽孢杆菌对平衡肠道菌群、改善肠道形态结构效果明显。

关键词：地衣芽孢杆菌；蛋鸡；肠道菌群；肠道形态结构

抗生素在畜产品中的残留直接威胁着人类的身体健康和安全，益生素是一种具有抗菌促生长作用的绿色饲料添加剂，是抗生素的理想替代品，被广泛的应用于畜牧业生产中。芽孢杆菌作为益生菌已经在生产中广泛的应用，但其作用机理还待进一步研究。本试验旨在研究地衣芽孢杆菌对蛋鸡肠道菌群和肠道形态结构的影响，探讨芽孢杆菌的作用机理。

1 材料与方法

1.1 试验材料

地衣芽孢杆菌：芽孢数200亿/g

1.2 试验动物及日粮

试验动物选用产蛋后期海蓝灰蛋鸡，参照2004年中华人们共和国农业行业标准产蛋鸡营养需要配合成粉状全价料，基础日粮配方及营养水平见表1。

1.3 试验设计与饲养管理

试验选用392日龄健康的海蓝灰蛋鸡360只，随机分为4个组，每个组设6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮的基础上，每千克日粮分别添加1×109 cfu/kg、2×109 cfu/kg、3×109 cfu/kg的地衣芽孢杆菌。试验期间，所有试验条件基本一致，半开放鸡舍，阶梯式两层笼养，每笼饲喂15只，专人负责，自由采食与饮水。预饲期1周，正式试验期4周。

1.3.1 基础日粮组成和营养水平（风干基础）%：玉米57.00；麸皮3.，0；豆粕12.00；棉粕8.00；菜粕4.00；花生仁饼3.00；石粉8.00；骨粉2.50；食盐0.30；赖氨酸0.11；蛋氨酸0.20；维生素0.04；微量元素0.15；胆碱0.10；沸石粉1.40，总计100；

1.3.2 营养水平%：代谢能2.52；粗蛋白16.86；赖氨酸0.74；蛋氨酸0.42；钙3.51；有效磷 0.41；蛋+胱 Met+Cy s0.68

1.3.3 微量元素预混料可为每千克全价料提供：Fe 60㎎；Cu 8㎎；Zn 80㎎；Mn 60㎎；I 0.35㎎；Se 0.3㎎；

1.3.4 维生素预混料可为每千克全价料提供：VA 8000 IU；VD3 2500 IU；VE 15 IU；硫氨酸1.5 ㎎核黄素4 ㎎；烟酸 20 ㎎；泛酸 8㎎；钴胺素0.015㎎；生物素 0.1㎎。

1.4 屠宰试验

饲养试验结束后，从每个组随机选取6只健康蛋鸡进行屠宰。

1.5 肠道菌群的测定

取含食糜的回肠5 cm左右，用冰块低温保存，采样完成后带回实验室，立即检测大肠杆菌数、双歧杆菌、乳酸杆菌数量。

无菌称取回肠食糜1 g，加入10 mL灭菌生理盐水，充分摇匀，进行逐级10倍稀释，每个样本做3个稀释度，每个稀释度作3个重复，大肠杆菌37 ℃有氧培养24 h后计菌落数，乳酸杆菌、双歧杆菌于37℃厌氧培养48 h后进行计菌落数。

每克内容物菌落形成单位即㏒ CFU·g-1=㏒（平均菌落×稀释倍数）

1.6 肠道形态结构的测定

屠宰时，迅速取出十二指肠、空肠，在十二指肠、空肠中段截取 1 cm左右的肠段，用生理盐水轻轻冲洗肠段内容物后，浸入4%多聚甲醛磷酸缓冲液，固定48 h后待用。

石蜡组织切片的制作程序：载玻片的制备[1]、组织包埋及切片[2]、苏木素一伊红（H.E）染色程序[3]。

观察与测量[4]：小肠绒毛高度、隐窝深度和粘膜层厚度，计算肠绒毛长度/隐窝深度（下文均用V/C表示）。

1.7 数据处理

结果以Mean±SD表示，数据处理与分析采用spss 13.0的One-Way ANOVA程序进行，利用Duncan进行差异显著性比较，以P<0.05作为差异显著。

2 结果与分析

由表2可见，试验组大肠杆菌数较对照组均有不同程度的下降，试验Ⅱ组大肠杆菌数均低于其他组（P>0.05）；试验Ⅲ组乳酸菌数、双歧杆菌数均高于对照组（P>0.05）。

由表3可见，与对照组相比，十二指肠肠绒毛的长度和V/C值呈现增加的趋势，肠壁厚度降有低趋势。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肠绒毛长度与对照组比分别增长19.07%、15.39%、19.53%（P>0.05），试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组比V/C值分别提高5.93%、1.54%、15.38%（P>0.05），试验Ⅰ、Ⅱ组肠壁厚度分别降低3.90%、19.15%（P>0.05）。

由表4可见，与对照组比，空肠肠绒毛的长度、V/C值增加，壁厚度有降低的趋势。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肠绒毛长度与对照组比分别增长11.43%、12.87%、17.92%（P>0.05），试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组比V/C值分别提高4.61%、0.38%、3.84%（P>0.05），试验Ⅲ组肠壁厚度比对照组降低0.63%（P>0.05）。

3 讨论

3.1 地衣芽孢杆菌对蛋鸡肠道菌群的影响

芽孢杆菌为革兰氏阳性耗氧菌，能够消耗肠道的氧气促进乳酸菌、双歧杆菌等有益厌氧菌的增殖，同时通过自身代谢产物、竞争养分、制造厌氧环境等方式抑制肠道内致病菌的繁殖。本试验中，向蛋鸡日粮添加3×109 cfu/kg的地衣芽孢杆菌可以增加肠道内乳酸菌、双歧杆菌的数量，降低大肠杆菌的增殖。

3.2 地衣芽孢杆菌对肠道形态结构的影响

小肠的肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度是衡量小肠消化吸收功能的重要指标。肠绒毛增高、肠黏膜厚度变薄可以增加养分的吸收。Anonymous（1999）报道肠绒毛增长可以增加与肠道内食糜的接触面积，从而增加营养物质的吸收[5]。韩正康（1991）认为肠绒毛长度/隐窝深度（V/C）值可综合反映小肠的功能状况，比值增高表明消化吸收功能增强[6]。目前研究表明：益生菌可以增加十二指肠、空肠、回肠肠绒毛高度和V/C值。。Samanya（2002）报道，成年蛋公鸡饲喂枯草芽孢杆菌可以提高回肠肠绒毛的高度[7]。本试验结果表明，蛋鸡日粮中添加地衣芽孢杆菌可以提高肠绒毛高度和V/C的值，使肠黏膜厚度降低。当地衣芽孢杆菌添加量为3×109 cfu/kg时，空肠的绒毛高度、V/C值均为最高，肠黏膜厚度最低。芽孢杆菌发挥改善肠道形态结构的作用可能一方面通过抑制有害菌的繁殖，来降低有害菌对肠道的损害作用；另一方面益生菌可以有效提高局部胃泌素（Gas）水平，促进胃酸分泌、胃窦收缩及改善胃肠道黏膜等生理功能[8]。

4 结论

4.1 蛋鸡日粮中添加地衣芽孢杆菌可以促进有益菌增殖、抑制有害菌的数量，改善肠道微生态区系。

4.2 地衣芽孢杆菌可以提高蛋鸡十二指肠、空肠的肠绒毛高度、V/C的比例，降低肠黏膜的厚度，改善肠道形态结构。

总体来看，在本试验中添加3×109 cfu/kg的地衣芽孢杆菌对平衡肠道菌群、改善肠道形态结构效果最明显。

参考文献：

[1]王伯法.病理学技术[M].人民卫生出版社，2006，6.

[2]谢富康.组织学与胚胎学实验指南[M].（第二版）.科学出版社，2003，8.

[3]Touchette K J，Carroll J A，Allee G L，Matteri R L，Dyer C J，Beausang L A，Zannelli M E.Effect of spray-dried plasma and lipopolysaceharide exposure on weaned Pigs：1.Effeets on the immune axis of weaned Pigs.J Anim Sci，2002，80：494-501.

[4]蔡俊杰.如何选择和使用切片石蜡[J].中国组织化学与细胞化学杂志，10（2）：233-234.

[5]Anonymous.1999.How do mannanoligosaccharides work？ Feed.Times 1：7–9.

[6]韩正康.家畜营养生理学[M].北京：农业出版社，1991.

[7]张广民.芽孢杆菌益生素在肉仔鸡饲料中的应用研究.[D].硕士论文.武汉：华中农业大学2003.

[8]Samanya，M.，and K.Yamauchi.2002.Histological alterations of intestinal villi in chickens fed dried Bacillus subtilis

var.natto.Comp.Biochem.Physio l.133：95-104.