稳定沉默TIPE2后削弱PolyI：C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡

[摘要] 目的 观察TIPE2稳定沉默后对TLR激动剂Poly I：C诱导THP-1凋亡的影响。 方法 以THP-1细胞为研究对象，使用不同TLR激活剂与THP-1细胞孵育后，采用荧光定量PCR检测TIPE2 mRNA表达。应用慢病毒技术稳定沉默TIPE2表达后，MTT法检测细胞增殖，Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡，免疫印迹分析TIPE2沉默后Caspase-8表达水平变化。 结果 TLRs激活剂中TLR3特异性激活剂Poly I：C可以显著上调TIPE2的表达（P<0.05），随作用时间延长，可显著抑制THP-1细胞增殖，并可诱导细胞凋亡。利用慢病毒技术稳定沉默THP-1细胞中TIPE2表达以后，可显著削弱Poly I：C诱导的TIPE2表达（P<0.05），TIPE2沉默后，Poly I：C抑制THP-1增殖和诱导细胞凋亡的效应显著削弱，随后免疫印迹的结果显示，Caspase-8的活化形式，p41/42表达下调。 结论 Poly I：C通过上调TIPE2表达可抑制THP-1细胞增殖，并可诱导细胞凋亡，稳定沉默TIPE2后可一定程度削弱上述效应，可能与下调Caspase-8的活性形式表达有关。

[关键词] Poly I：C；TIPE2；免疫；TLR；凋亡

[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）16-0001-05

[Abstract] Objective To investigate the influence of stably silent TIPE2 on THP-1 apoptosis induced by TLR agonist Poly I：C. Methods THP-1 cells were selected as the study subjects. The expression of TIPE2 mRNA was detected by fluorogenic quantitative PCR after incubation of THP-1 cells with different TLR activating agents. After stable silence of TIPE2 by lentiviral technique， the cell proliferation was detected by MTT， apoptosis was detected by Annexin V/PI double-staining method， and changes of Caspase-8 expression level after silence of TIPE2 was analyzed by western blot. Results TLR3 specific activator Poly I：C could significantly up-regulate the expression of TIPE2（P<0.05）. Along with the time of action， it could significantly inhibit the proliferation of THP-1， and induce apoptosis. Stable silence of TIPE2 in THP-1 by lentiviral technique could significantly impair the TIPE2 expression induced by Poly I：C （P<0.05）. After silence of TIPE2， the effects of Poly I：C on inhibition the proliferation of THP-1 and induction of apoptosis were significantly impaired， and the result of following western blot showed active form of Caspase-8 and down-regulation of p41/42 expression. Conclusion By up-regulating the expression of TIPE2， Poly I：C can inhibit the proliferation of THP-1， and induce apoptosis， which can be partially impaired by stable silence of TIPE2， possibly due to down-regulation of Caspase-8 active form expression.

[Key words] Poly I：C； TIPE2； Immune； TLR； Apoptosis

免疫系统内稳态的维护机制极其复杂和神秘，改变调控免疫细胞死亡或者活化扩增免疫细胞均可以打破免疫细胞的内稳态环境，最终带来极为致命的炎性疾病，目前研究发现一组超家族蛋白对免疫系统的内稳态维持至关重要。尤其是具有hexahelical bundle 结构的蛋白称之为死亡效应domain（DED），与Caspase家族蛋白的CARD结构域以及募集区域有结构类似，参与到细胞死亡和其他的信号通路中。

TIPE中坏死因子诱导蛋白8-类似蛋白2作为这类家族蛋白的成员之一，近年来，在机体免疫的内稳态中扮演重要作用，其主要机制与调控T细胞受体和Toll样受体信号通路有关，除了在炎症组织中表达外，TIPE2还在髓样组织和多种肿瘤细胞中表达，说明其中可能发挥着不同的功能[1]。有报道显示，TIPE2可以调控Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）的表达，并对周围不同的刺激信号强度产生响应[2]。但是上游TLR的活化是否也可以影响TIPE2的表达，是否可以影响人单核/巨噬细胞活性和增殖？尚未见有相关的报道。本项目于2014年1月～2015年12月期间，以人单核细胞株THP-1为考察对象，考察不同TLR激动剂对TIPE2表达的影响，并探讨相关的分子机制。