流式细胞术分析带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

【摘 要】目的：研究带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群的水平及变化特点，为其治疗提供参考。方法：采用多参数四色免疫荧光标记流式细胞术分析比较90名带状疱疹患者及40名健康对照组的外周血T淋巴细胞亚群。结果：与对照组比较带状疱疹患者CD3+、CD4+细胞百分率明显减少，CD4+/ CD8+比值降低，CD8+细胞百分率升高，以上指标与正常对照组比较差异显著（P<0.01）。结论：带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群存在免疫异常，监测其T淋巴细胞亚群水平对评估患者的细胞免疫功能及疾病的诊断、预后有积极的临床意义。

【关键词】带状疱疹；T淋巴细胞亚群；流式细胞术

【中图分类号】R730.4 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-1898-01

Changes in peripheral blood T lymphocyte subsets in patients with herpes zoster flow cytometry

Lu Feng 1， Shang guan Li juan 2，Chen Tao 1 Zhan Hong ying1，

（1.Central Laboratory， Jian yang City People"s Hospital， Jian yang， Sichuan， 641400； 2.Orthopedics Department， Jian yang City People"s Hospital， Jian yang， Sichuan， 641400）

【Abstract】Objective： The purpose of the research is to study the peripheral blood of patients with herpes zoster levels and changes of T lymphocyte subsets， and the information will serve as future reference for its potential treatment. Methods： A multi-parameter four-color immunofluorescence flow cytometry analysis of peripheral blood comparing 90 patients with herpes zoster and 40 healthy controls T lymphocyte subsets. Results： Compared with control group patients with herpes zoster CD3 +， CD4 + cells was significantly reduced， CD4 + / CD8 + ratio decreased， CD8 + cells was elevated above the normal control group index and the difference was significant （P <0.01）. Conclusion： Patients with herpes zoster presence of peripheral blood T lymphocyte subsets of immune abnormalities， monitoring their levels of T lymphocyte subsets evaluate cellular immune function and disease diagnosis in patients. A positive clinical prognosis is expected.

【Key words】： herpes zoster、t lymphocyte subsets、flow cytometry

带状疱疹是一种由水痘-带状疱疹病毒（VZV）感染引起的疾病，其发病与机体免疫状态特别是细胞免疫功能降低有关[1]。我们利用流式细胞仪检测带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群，以探讨带状疱疹与T淋巴细胞的关系。

1资料与方法

1.1临床资料

1.1.1标本来源90例患者均为我院皮肤科收治的患者，全部病例结合病史及临床特点参照文献[2]确诊为带状疱疹的患者。年龄25-81岁，平均年龄56岁，其中男48例，女32例。在选择病例时我们排除了以下情况：伴有严重的心、肺等系统性疾病患者；恶性肿瘤患者；妊娠及哺乳患者；合并红斑狼疮等自身免疫性疾病患者；应用免疫抑制剂患者。正常对照组40例，为我院体检中心健康体检者，年龄20-76岁，平均年龄48岁，其中男22例，女18例。

1.2仪器与方法

1.2.1 仪器与试剂 美国Beckman Coulter 公司生产的FC500流式细胞仪及配套试剂。

1.2.2 检测方法 使用直接免疫荧光标记全血溶血法，流式细胞仪测定被检者外周血T淋巴细胞亚群。

取CD45FITC/CD4PE/CD8-ECD/CD3PC5四色荧光标记抗体20μl放入标准试管中，加入被检者的外周抗凝全血100μl，振荡混匀后，室温避光反应20分钟；取出试管，加入500μl Optilyse C溶血素，即刻振荡混匀后，室温避光反应10-15分钟（溶血完全后，管内液体透亮）；加500μl的PBS，震荡混匀后，室温避光反应10分钟后，上机检测。

1.3 统计学方法 结果以均数±标准差 （ ±S）来表示，两组间比较采用两样本均数t检验。

2 结果

带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群测定结果见表1。测定组与对照组相比较CD3+、CD4+细胞百分率、CD4+/ CD8+比值明显低于对照组，CD8+细胞百分率明显高于对照组。

3 讨论

临床流式细胞学检验技术（CFC）是检验医学领域继基因诊断技术平台之后诞生的又一个新型检验技术平台，通过对来自血液、组织、脱落细胞等标本中细胞表面及其内部的核酸、蛋白质、多肽成分的定性定量分析，广泛用于临床疾病的诊断与鉴别、病情监测、疗效评估和预后判断等[3-5]外周血T淋巴细胞亚群含量分析是CFC临床应用的主要项目之一。

带状疱疹的病原是水痘-带状疱疹病毒（VZV），VZV在不同免疫力的人群中引起两种独立的临床疾病，在儿童人群中易引起原发感染，常表现为自限性，症状较轻；部分病毒可持久地以一种潜伏的形式长期存在于脊髓神经或颅神经的感觉神经节的神经元中[6]，当机体免疫力下降或在各种理化因素刺激下，神经节内潜伏的病毒被激活并增值，进而使受侵犯神经轴突所支配区域的局部皮肤出现呈簇状分布的疱疹等，同时，受累神经节发生炎症或坏死，引起不同程度的神经痛，严重影响患者的生活质量。激发带状疱疹的原因尚未完全清楚。目前大多研究表明细胞免疫抑制可能是病毒再激活和发生播散的主要原因[7]。T淋巴细胞是机体免疫系统中最重要的一类细胞群，在正常机体内各T淋巴细胞亚群相互作用，并保持一定的平衡，以确保免疫功能的正常，当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，即可导致机体免疫系统功能紊乱，并发生一系列的病理改变，使机体感染病毒的机会增加。本资料结果表明，带状疱疹患者外周血T细胞亚群CD3+、CD4+明显下降，CD8+升高，CD4+/ CD8+比值降低，与对照组比较均有显著性差异（p<0.05）。提示带状疱疹患者存在T细胞亚群数量的变化，存在特异性的T细胞免疫抑制。外周血T细胞亚群的水平，特别是CD4+/ CD8+比值是反映免疫内环境稳定的一个重要标志，VZV被激活通过复制、增值、变异表现出抗原性，诱发免疫应答，导致特异性细胞免疫抑制，使CD4+/ CD8+比值降低，可见CD4+/ CD8+比值下降在病毒性疾病中有着重要意义。但也有个别学者检测总CD3+细胞与正常人比较无明显变化[8]，这可能是由于各研究检测方法不同与实验数据统计量差异引起的。不同研究均表明带状疱疹患者存在着特异性的T细胞免疫抑制。带状疱疹细胞免疫功能低下可能与患者血清可溶性白细胞介素-2受体明显升高，可消耗白细胞介素-2（IL-2）使IL-2介导的T细胞亚群的分化、增值减弱有关[9]。也有研究证明CD4+T细胞参与了带状疱疹的发展，特别是分泌IL-2和TNF-α的Th1细胞亚群的改变影响了疾病的转归[10]。

利用流式细胞仪检测带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群是研究细胞免疫在该病发病机制中作用的一个重要方法。对于发病高危人群早期监测T淋巴细胞亚群水平，可以及时采取积极的预防措施，避免严重后遗症的出现。

参考文献

[1] 张炜.带状疱疹病毒致病性和防治的研究进展[J].国外医学皮肤病分册，1996，22：257.

[2] 赵辩.临床皮肤病[M].3版.南京：江苏科学技术出版社，2001：300. [3] Okada Y Flow cytometry-------the basis of cell surface analysis and clinical application[J].Rinsho Byori，2010，58（11）：1121-1130

[4] Avlasevich S，Bryce S，De Boeck M，et al.Flow cytometric analysis of micronuclei in mammalian cell cultures：past，present and future[J].Mutagenesis，2011，26（1）：147-152.

[5] Siebert JC， Walker EB. Monitoring cytokine profiles during immu-notherapy[J].Immuntherapy，2010，2（6）：799-816

[6] 杨国亮，王侠生.现代皮肤病学[M].上海：上海医科大学出版社，1996.293-297.

[7] 王家璧.带状疱疹的诊治及治疗中的误区[J].中国临床医生，2009，37（12）：5-6.

[8] 李大宁，余红.带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群分析.上海免疫性杂志，1995，15：181.

[9] 余春艳，张盈华，张立朝，等.带状疱疹患者可溶性IL-2R和T细胞亚群的变化.细胞与分子免疫性杂志，2000，2：146

[10] 吴敏毓，刘恭植.医学免疫学[M].第3版.合肥：中国科技出版社，1999：78.