MMP—2和MMP—9在Hp阳性的脑梗死患者血清中的表达

[摘要] 目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）感染阳性的脑梗死（CI）患者血清中MMP-2和MMP-9的表达情况。 方法 选取2012年1月～2014年3月在菏泽市立医院神经内科住院的CI患者100例，患者均经头颅CT检查、颈动脉造影检查并结合病史确诊，同时选取无CI体征的健康体检者100例为对照组，用ELISA法测定两组的Hp细胞毒素相关基因蛋白（Hp-CagA-IgG），比较各组的Hp-CagA-IgG阳性率。再把Hp-CagA-IgG阳性的CI患者分为Hp重度感染CI组、Hp轻度感染CI组，把对照组中Hp-CagA-IgG阴性的受试者作为Hp阴性对照组。用ELISA法测定MMP-2、MMP-9，比较各组的MMP-2、MMP-9。 结果 CI组的Hp-CagA-IgG阳性率为72.1%，明显高于对照组的44.6%（P<0.01）。Hp重度感染CI组的MMP-2为（373±126）μg/L、MMP-9为（399±137）μg/L，Hp轻度感染CI组的MMP-2为（267±139）μg/L、MMP-9为（316±132）μg/L，均明显高于Hp阴性对照组（P<0.01）；Hp重度感染CI组与Hp轻度感CI组的MMP-2、MMP-9比较，差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 Hp感染能使CI患者的MMP-2和MMP-9表达量增高，从而使其发生CI的概率增高。

[关键词] 脑梗死；幽门螺杆菌；感染；基质金属蛋白酶-2；基质金属蛋白酶-9

[中图分类号] R743.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（c）-0089-03

Hp是世界上感染最普遍最广泛的细菌之一。Hp感染导致消化系统疾病已有大量的研究，并且也已被全世界公认，但是，对Hp感染导致脑梗死（cerebral infarction，CI）的研究国内外报道较少，并且还存在争议，需要做大量、深入的试验研究来证实CI与Hp感染之间的关系和其可能的发病机制，从而为CI的早期防治提供一个新的手段和依据。本研究通过检测Hp细胞毒素相关基因蛋白（Hp-CagA-IgG）及基质金属蛋白酶2和9（MMP-2和 MMP-9）在血清中的表达，来探讨Hp感染与CI形成之间关系及其可能的发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月～2014年3月在菏泽市立医院神内科住院的CI患者，回顾性分析行头颅CT/MRI检查、颈动脉造影检查并结合临床病史诊断为CI的患者100例，其中男51例，女49例，年龄49～82岁，平均（65.3±10.6）岁，患者均符合第四届全国脑血管疾病会议制订的诊断标准。并同时选取无CI体征的健康体检者100例为对照组，其中男50例，女50例，年龄50～85岁，平均（68.0±9.4）岁。两组均除外消化系统疾病、结缔组织病、肝肾系统疾病、免疫系疾病、合并感染性疾病、肿瘤、甲状腺功能亢进或减低、贫血、抗Hp治疗史的患者及近期服用过抗氧化药物（如B族维生素或叶酸）患者。

1.2 试剂及仪器

1.2.1 试剂 Hp-CagA-IgG试剂盒，购自朗顿生物科技有限公司，MMP-2和MMP-9试剂盒，购自上海研谨生物科技有限公司。

1.2.2 仪器 离心机：北京医用离心机厂，型号为LD-42；酶联免疫检测仪：美国Instruments.Inc，型号为EL×800；低温冰箱：日本Sanyo公司，型号为MDF-U332；洗板机：BIO-RAD公司，型号为1575；孵育箱：HIRA SAWA公司，型号为WJ-6C。

1.3 研究方法

用ELLSA法检测Hp-CagA-IgG及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9，严格按照试剂盒说明书的操作规范去操作。

所有受试者于清晨空腹抽取静脉血4 ml，沿管壁缓慢注入洁净的玻璃试管内，以3000 r/min的速度离心10 min，离心半径为14 cm，取淡黄色上清液存于封闭玻璃试管中备用。①检测CI组及对照组的血清Hp-CagA-IgG，比较两组的Hp-CagA-IgG阳性率。②根据检测Hp-CagA-IgG的OD值大小，把Hp-CagA-IgG阳性的CI患者分为Hp轻度感染CI组（100≤OD≤400），Hp重度感染CI组（OD>400）；把对照组中Hp-CagA-IgG阴性的受试者作为Hp阴性对照组。③用ELISA法分别检测MMP-2和MMP-9在3组（Hp阴性对照组、Hp轻度感染CI组、Hp重度感染CI组）血清中的表达。比较各组的MMP-2、MMP-9。

1.4 统计学处理

数据使用SPSS 13.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两样本均数比较采用t检验，多个样本均数比较采用完全随机设计资料的方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CI组与对照组Hp-CagA-IgG阳性率的比较

CI组的Hp-CagA-IgG阳性率（72.1%）明显高于对照组的44.6%，差异有统计学意义（P<0.01）。

2.2 Hp阴性对照组、Hp轻度感染CI组、Hp重度感染CI组MMP-2、MMP-9的比较

Hp轻度感染CI、Hp重度感染CI组的MMP-2、MMP-9均明显高于Hp阴性对照组，差异有统计学意义（P<0.01）；Hp重度感染CI组与Hp轻度感染CI组比较，差异有统计学意义（P<0.01）（表1）。

3 讨论

研究表明，Hp感染后的致病作用与其菌型有关。Hp-CagA-IgG和空泡毒素（VacA）是Hp的毒力标志。VacA可能是导致消化性溃疡的重要因子，Hp-CagA-IgG是一种高分子Hp抗体，Hp-CagA-IgG 阳性菌株脂多糖是一种特殊的内毒素，其增强的毒力和细胞毒素性产物可能与CI相关[1]。Hp-CagA-IgG是Hp的一个标志性毒力因子，具有很强的毒性，与致病力关系密切，虽然含量甚微，却能引起强烈的免疫应答[2]。Pasceri等[3]通过对缺血性心脑血管疾病总结了10个回顾性研究、3个前瞻性研究，对Hp及其毒力菌株状况与心脑血管疾病的关系进行分析，结果显示心脑血管病与Hp-CagA-IgG菌株感染之间存在相关性，Hp-CagA-IgG菌株感染极有可能是相关心脑血管疾病的独立危险因素。本研究结果显示，CI组的Hp-CagA-IgG阳性率均明显高于对照组，显示CI与Hp感染可能呈正相关，尤其是Hp-CagA-IgG菌株感染与CI的发病机制可能有更重要的关系。Hp感染后，Hp-CagA-IgG抗体与颈动脉血管壁相关抗原发生交叉反应，启动炎症过程，诱导急性炎性产物的表达和免疫反应，导致血管内皮细胞受损和功能障碍，进而启动颈动脉粥样硬化的病理演变过程，诱发CI的发生[4-5]。Hp感染导致全身性炎症反应，加剧粥样硬化的发展和临床症状的加重[6]。

基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名，是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为MMP-1～26。根据作用底物以及片断同源性，将MMPs分为6类，为胶原酶、明胶酶、基质降解素、基质溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92 kD，命名为MMP-9；另一种非糖化，分子量为72 kD，被称为MMP-2。

近年来，动脉粥样硬化的“感染学说”受到医学界的关注[7]。炎性细胞的浸润分泌多种炎性反应因子和脂质过氧化物，诱导内皮细胞大量分泌MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9降解内皮细胞基底膜参，加速低密度脂蛋白渗透，有利于单核细胞入侵，并且与内皮细胞黏附，使内皮细胞转变为泡沫细胞，这是动脉粥样硬化的关键环节这一[8]。此外，在泡沫化过程中，多种细胞因子调节其他细胞分泌大量的MMP-2和MMP-9，进一步降解细胞外基质，促使脂质条纹的形成，并且加速动脉粥样硬化斑块的发展[9]。本研究结果显示，Hp轻度感染CI、Hp重度感染CI组的MMP-2、MMP-9均明显高于Hp阴性对照组（P<0.01）；Hp重度感染CI组与Hp轻度感染CI组比较，差异有统计学意义（P<0.01），说明Hp感染在CI的发生、发展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagA-IgG菌株感染与炎性反应及MMP-2和MMP-9的浓度与CI的发生、发展之间的内在联系必定会为CI的防治策略开拓更新的思路。

[参考文献]

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[3] 王玉梅，白彩琴.慢性产细胞毒素相关蛋白A幽门螺杆菌感染与动脉硬化性脑梗死的发病关系探讨[J].陕西医学杂志，2004，33（9）：779-781.

[4] 许先进，金立军.幽门螺杆菌感染与冠心病相关性的研究进展[J].医学综述，2010，16（2）：244-248.

[5] 李唯琼.幽门螺杆菌与脑梗塞相关性的探讨[J].当代医学，2009，15（30）：17-18.

[6] Diomedi M，Pietroiusti A，Silvestrini M，et al.CagA positve Helicobacrer pylori strains may influence the natural history of atherosclerotic stroke[J].Neurology，2004，63（5）：800-804.

[7] 王腾玉，彭成海，田野.基质金属蛋白酶及其抑制剂与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系研究进展[J].中国综合临床，2012，28（9）：997-999.

[8] 周波，刘利慧.冠心病患者血清炎症因子水平测定及其临床意义[J].实用医药，2014，31（2）：121-122.

[9] Macin SM，Perna FR，Farías EF，et al.Atorvastation has an important acute anti-inflammatory effect in patients with acute coronary syndrome：results of a randomized，double blind，placebo-controlled study[J].Am Heart J，2005，149（7）：451-457.

（收稿日期：2014-08-01 本文编辑：许俊琴）