14味中药醇提液、水提液对人肝癌SMMC—7721细胞株的体外抑瘤实验及凋亡研究

【摘要】 目的：比较14种常用抗肿瘤中药的体外抑肝癌SMMC-7721效果及机制研究。

【关键词】 肝癌SMMC-7721； 抑瘤

中图分类号 R73 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）35-0145-02

肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，据最新统计，全世界新发肝癌患者每年约60 万，居恶性肿瘤的第5位[1]，死亡率居第三位[2]，被称为肿瘤之王。中药治疗肿瘤是中国独特的治疗方法，中药以其资源丰富、副作用少等优点应用于临床，在肝癌的治疗中发挥着不可替代的作用。本文选用抗肝癌复方制剂中出现频率较高的14味中药，分别测定其水提液、醇提液对肝癌SMMC-7721细胞株体外增殖的影响，并用凋亡法初步探讨其抗癌机制，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

RPMI1640培养基系GIBCO公司产品，按生产说明书配制，过滤除菌备用；胰蛋白酶系SIGMA公司产品，以1640培养液配制成0.25%浓度备用；小牛血清为杭州四季青公司出品，四甲基偶氮唑盐（MTT）系AMRESCO分装，用生理盐水配制5 mg/ml浓度，分装避光保存，试剂均为分析纯。

1.2 主要仪器

倒置相差显微镜为奥林帕斯LH50A型，净化工作台为苏州产SW-CJ-IF型，酶标仪为广东产HT2型。

1.3 肿瘤细胞株及其培养

3 讨论

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，占各种恶性肿瘤死亡率的第二位，近年来随着现代医学影像诊断技术的进步和肿瘤标志物检查的普及，使早期肝癌的诊断成为可能，使其治疗有效率和生存率不断提高，但对中晚期肝癌的疗效却十分有限。而中医讲究辩证论治、治疗根本、扶正祛邪，因此发挥中医优势，探索针对肝癌的有效治法十分重要。在防治方面，目前多主张多途径、多靶点的综合治疗。作为综合治疗的一部分，我国传统的中医药也在肝癌的治疗方面占有重要地位。有关中医药作用机理的基础实验研究与临床实验研究表明：中药有阻断癌前病变、抑制癌细胞增殖[3]、诱导癌细胞凋亡、抑制癌基因表达等作用，在临床上常用的抗肝癌方剂有龙力胶囊[4]、肝康冲剂等，均为水煎汤剂，其方剂组成中即含有本实验药材黄连，但在本实验中，抗肿瘤中药的水提液抑瘤率远低于醇提液，这个结果给在中药抗肿瘤的领域中一个很好的启示，长期以来人们用水煎汤剂抗肿瘤尚能取得较好疗效，如果结合本实验结果，采用抑瘤率更高的醇提液，应该能达到更好的抗肿瘤作用。另外，本实验的14种药材抑瘤率也各不相同，其间相差几倍至几十倍，如果笔者选用其中对肿瘤抑制率较高的药材相互组合，在不违反中医配伍禁忌的情况下，应用于肝癌患者，预期应该能达到更好的疗效，不过这还有待更深入的研究。

本实验显示，重楼是通过诱导细胞凋亡来达到抗肿瘤作用的。有关细胞死亡过程的研究，到目前为此，人们已经知道的有两种方式，即细胞坏死与细胞凋亡。细胞坏死是早已被认识到的一种细胞死亡方式，而凋亡则是近年逐渐被认识的一种细胞死亡方式。细胞凋亡是正常机体细胞在受到生理和病理性刺激后出现的一种自发的死亡过程，它在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要的意义。机体在产生新生细胞的同时，衰老和突变的细胞通过凋亡机制被清除，使器官和组织得以正常地发育和代谢。细胞凋亡也参与一些病理过程，如肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染和神经退化性疾病等。细胞凋亡是一个主动的、信号依赖的过程，可以由许多因素所诱导，如放射线照射、毒素、药物、缺血缺氧、病毒感染等。研究发现，这些因素大多可以通过激活死亡受体而触发细胞凋亡机制[5]。

近年的研究发现，中药抗肿瘤是通过多中心、多途径、多靶点来作用的，其中诱导肿瘤细胞凋亡是其中的途径之一。此方法最诱人的前景是以诱导细胞凋亡为目标的基因治疗，也就是通过分子生物学的途径在肿瘤细胞内导入诱导凋亡的活化基因或抑制凋亡的灭活基因，以达到提高肿瘤细胞敏感性并杀灭肿瘤细胞的作用。目前已明确能诱导肿瘤细胞凋亡的中药有很多，如全蝎水浸液提取物可诱导HL-60细胞凋亡、去甲斑蝥素[6]、人参皂甙、甘草甜素、黄芩皂甙能诱导肝癌细胞凋亡，紫杉醇是从天然植物红豆杉中提取的抗癌药，可诱导人急性早幼粒细胞白血病HL-60、人乳腺癌细胞系MCAS、人食管癌细胞Fac109细胞凋亡等。事实上，中药抗肿瘤的作用途径很多，如免疫增强作用[7]、诱导分化作用、影响拓扑异构酶[8]、抗血管生成、调节基因表达[9]、逆转多药耐药[10]等。其不同的提取方式对肿瘤细胞的不同作用机制及本实验其余13味抗肿瘤中药作用机制的探讨，还需要进行更深入的实验研究。

参考文献

[1]储真真，陈立宏，冯久桓，等.中医药治疗原发性肝癌研究进展[J].中医学报，2013，28（10）：1446.

[2]骆丹，叶丽红.中药治疗肝癌在实验研究领域的发展现状及趋势[J].世界华人消化杂志，2008，16（26）：2964-2968.

[3]袁学文，陈毓杰，叶立新.中药仙鹤复方水提取物对s180肉瘤和H22肝癌细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用研究[J].临床合理用药，2013，6（8）：7-8.

[4]宋长城，张百红，胡兵.龙力胶囊对s180荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用[J].现代肿瘤医学，2010，18（12）：2326-2327.

[5]李娜，高俊岩，刘敏.细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展[J].当代医学，2009，15（16）：13-14.

[6]常城，何仁胜，刘少平，等.去甲斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡机制及临床应用前景的研究[J].中国中医急症，2013，22（9）：1525-1527.

[7]陈涛，陈茂华，胡月琴，等.珠子参多糖抗肝癌作用的实验研究[J].时珍国医国药，2010，21（6）：1329-1331.

[8]刘艳红，章秀丽，陈少文，等.人参皂苷Rh2诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究 [J].中国实验诊断学，2011，15（12）：2011-2012.

[9]蔡翊，王群伟.黄芪总皂苷抗肝癌活性研究[J].中国现代医学杂志，2011，21（34）：4258-4260.

[10]张晓.重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的实验研究[D].福州：福建中医药大学，2010.

（编辑：朱姣）