禁用兽药—孔雀石绿

孔雀石绿是一种人工合成的三苯甲烷类工业染料，被应用于制陶业、纺织业、皮革业、食品颜色剂和细胞化学染色剂等。自1933年以来，因其价格低廉、效果显著，孔雀石绿开始作为驱虫剂、杀菌剂和防腐剂在水产养殖中出现，许多国家曾广泛用于控制鱼和鱼苗真菌的生长、孵化过程中鱼卵的消毒、活鱼运输中的消毒以及鱼苗鱼种下塘前的消毒，主要用于预防和治疗养殖及运输过程中高发的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病，是药用染料中抗菌效力较强的一类。由于孔雀石绿对防治水霉病等有特效，曾在水产养殖中大量使用，由此也引发很多问题。

一、孔雀石绿性质

孔雀石绿别名碱性孔雀（石）绿、品绿盐基块绿、碱性绿、盐基块绿、苯胺绿等，为金属光泽的深绿色结晶状固体，易溶于水和乙醇，是由一分子苯甲醛与两分子二甲基苯胺在浓硫酸或氯化锌存在的条件下聚合而形成的，以多种形式存在，主要是以草酸盐或盐酸盐的形式存在于醋酸盐和盐酸盐的混合液中。孔雀石绿盐酸盐是一种工业级化学物，是一种双锌盐，是在孔雀石绿生产过程中加氯化锌而合成的。与其它三苯甲烷一样，孔雀石绿以盐、醇类化合物或假碱化合物形式存在时呈二价阴离子形式。由于孔雀石绿假碱的脂溶性较大，因而认为孔雀石绿进入细胞可能是以假碱的形式完成的。孔雀石绿分工业用和试剂用两大类：工业用孔雀石绿价值低廉，但含有金属化合物;试剂用孔雀石绿中有草酸盐、硫酸盐、盐酸盐和氯化锌复盐4种，其中氯化锌复盐为黄铜色棱形结晶，以染料盐和甲醇或假碱两种离子形式存在，易溶于水，还有很强的脂溶性可以进入细胞，毒性最强。

二、孔雀石绿毒性

孔雀石绿在生物体内代谢还原成无色孔雀石绿。由于孔雀石绿和无色孔雀石绿潜在的致突变、致畸和致癌危险性，许多国家均禁止其作为人类食用鱼的兽药使用。

1、对水生动物的毒性

孔雀石绿的毒性较强，对水生动物的安全浓度较低。随着暴露时间、温度和浓度的增加， 孔雀石绿和无色孔雀石绿对鱼类的毒性增强，另外毒性也与环境因素，特别是pH值、硬度和溶解氧的多少有关。孔雀石绿能使鱼卵染色体发生异常，并使红细胞产生微核，可使胚胎的存活率下降，孵化时间延长，孵化出的鱼苗出现脊椎、头、背鳍等部位的畸变。使鱼鳃严重受损，鳃部上皮细胞和片层细胞坏死，白细胞浸润，引起肝脏窦状腺充血，局部黑斑症、肝脏肥大、形成空泡，以致肝细胞坏死、肝硬化等，引起肾脏回旋细管基部的上皮细胞增殖，细胞核溶解破裂，红细胞皱缩等细胞坏死的病症，并在荚膜和细血管从之间形成缺口，使肾小球收缩变形，肾细管的腔梢扩大;对消化道也造成不利影响，肠道上皮细胞变性坏死，杯状细胞数量增加，肠绒毛和黏膜皱褶破裂，肌层和绒毛膜的结构破坏;位于脑垂体腺的促性腺细胞活性受到抑制，性腺退化;能造成鱼体渗透调节和糖代谢的紊乱，肝脏和肌肉中的糖原分解引起高血糖、高氯血，蛋白质的合成能力也下降，造成鱼体贫血。孔雀石绿和无色孔雀石绿对鱼类器官（肾、肠）造成损害后，鱼体排泄和解毒机能发生障碍，降低了药物在鱼体内的消除速度，造成药物蓄积性中毒，最终影响鱼类的正常摄食和生长发育。

2.对哺乳动物的毒性

孔雀石绿代谢产物的衍生物及初级和次级芳香胺在癌症发生中起着重要的作用。这些产物会穿过细胞膜，到达细胞核中的DNA，破坏DNA导致癌变;实验显示，孔雀石绿可导实验动物子代出现骨骼、心脏、肝和肾发育异常，表明孔雀石绿有致畸作用;无色孔雀石绿的致突变作用的靶器官是肝脏，啮齿类动物对无色孔雀石绿更敏感，孔雀石绿和无色孔雀石绿的N去甲基化代谢产物的激活方式与致癌的苯胺类物质类似，由此认为孔雀石绿和无色孔雀石绿在体内和体外均具有致突变作用。另外，孔雀石绿可引起肝、肾、心脏、脾、皮肤、眼睛、肺等多器官毒性。

三、孔雀石绿代谢

孔雀石绿进入机体后，具有2种代谢途径：一是孔雀石绿在还原酶的催化下降解成无色孔雀石绿，在组织中残留，分布于血清、肝、肾、皮肤、肌肉和脂肪等全身组织中。无色孔雀石绿的结构与苯胺相似，它是合成孔雀石绿的前体物质，因此也被看成是商品孔雀石绿的污染杂质。二是在细胞色素P450催化下经N脱甲基作用生成初级和次级代谢产物芳香胺。无色孔雀石绿可在氧化酶的作用下被重新氧化成孔雀石绿，也可在TPO催化下脱甲基生成初级和次级代谢产物芳香胺，其残留量大小是由代谢时间决定的。

四、孔雀石绿检测

目前孔雀石绿的检测主要采用液相色谱法。高效液相色谱法（HPLC）可以检测孔雀石绿和无色孔雀石绿，普遍使用的是利用衍生柱（填充二氧化铅）同时测定两种物质。其基本原理是：无色孔雀石绿和孔雀石绿的保留时间不同，无色孔雀石绿从分析柱洗脱后再经过衍生柱（填充二氧化铅），在二氧化铅的作用下氧化成孔雀石绿，这样利用紫外检测器对孔雀石绿和无色孔雀石绿都可以检测。另外，也可以不采用衍生柱，孔雀石绿先还原成无色孔雀石绿，利用无色孔雀石绿能产生荧光的性质进行测定，此方法的特点是灵敏度较高，但测定的是孔雀石绿的总量，无法分别定量孔雀石绿和无色孔雀石绿。高效液相色谱串联质谱法（HPLCMSMS）是近年来发展起来的新的检测技术，其与液相色谱法不同的是：使用三重四极杆质谱或离子阱质谱作为检测器，代替高效液相色谱的紫外检测器，该方法兼具定性功能、灵敏度高，但检测费用昂贵。除此之外，还有薄层色谱法、普通分光光度法等。薄层色谱法虽然具有简便快速的特点，但是不能同时检测孔雀石绿的代谢物无色孔雀石绿。分光光度法：普通分光光度法检测限较高，灵敏度较低，准确性较差，也不能用于代谢物无色孔雀石绿的检测，而且仅仅局限于水样的检测，尚未见该方法在复杂样品基质中的应用，仅可用于孔雀石绿原料药等的测定。

五、孔雀石绿替代

孔雀石绿因其效果好、价格低廉曾被广泛使用，又因其残留时间长、毒副作用大而被禁用。作为一种化工常用原料、试剂，难以禁止生产，其价格低廉、对某些水产病害有特效的特点，加大了对其控制的难度。因此，研制价格低、效果好、对环境没有污染的替代药品是控制孔雀石绿违禁使用的关键。